用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验

1. 用含10%胎牛血清的完全培养液稀释处于指数生长期的Sf9细胞至约5×106细胞/ml。在蚀斑试验之前几小时，以两个不同的密度将细胞种于60 mm 组织培养皿中。病毒毒种贮液的每--稀释度均设复孔，于27℃培养。 2. 如下用无血清完全培养液制成5 ml 的病毒贮液的系列稀释液： （1）纯病毒毒种贮液：10-6、10-7、10-8稀释 （2）转染上清：10-4、1

(1) 选择经 24h~48 h 培养的 4X106/ ml 鸡胚成纤维细胞若干瓶。(2) 将细胞瓶按病毒稀释度分组标记，每个稀释度为 2 瓶，对照 2 瓶。(3) 配制含 2%~5%小牛血清的 0. 5% 水解乳蛋白的 Hanks 稀释液 100ml:0. 2%或 0. 5%Hanks 液 97 ml(也可用 Eagle MEM 或 RPMI 1640 培基），灭活小牛血 2 ml,双抗(10

(1) 将单层细胞 (2X 106/ml, 6 ml)培养在直径 60 mm 的平皿上，生长液为含 10% 小牛血清、89%水解乳蛋白一酵母浸液培养液，加双抗并调 pH 至 7.2 。(2) 培养物置于潮湿 5% CO2 培养箱中，于37℃培养成单层，除去生长液用 Hanks 液洗一次。(3) 每皿加入各稀释度病毒液 0. 1 ml 或 0. 2 ml, 轻轻摇匀，使之均匀分布于整个细胞层， 37

(1) 用细胞培养板 (6孔)，若用旧板，洗净后浸于 95% 酒精中5 min, 再用紫外线照射 2-4 h备用，新板可直接使用。(2) 将传代细胞系经胰酶消化分散后，用含 5%小牛血清的 Eagle 将细胞配成 3 X 105/ml(依细胞种类而定)。(3) 按每孔 3ml 加入细胞悬液，在 37℃ 5% CO2 培养箱中培养 24 h 或 48 h, 直至形成单层。(4) 除去生长液，每孔加入