抗体或蛋白质中硫基的引入实验

实验分类：

生物化学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

抗体或其他蛋白质必须具有自由硫醇集团才能获得固定酶活性。这种基团可以由特定试剂引入，在此介绍与 S-乙酰疏基丁二酸酐的反应。

来源：《酶学实验手册》

来源：丁香实验

操作方法

基本方案

实验所需「试剂」具体见「其他」在氮气条件下，每 1 ml 抗体或蛋白质溶液加入 0.1 ml AMSA 溶液，密封试管并在室温下缓缓搅拌 0.5 h。为移除乙酰基并暴露硫醇基团，需加入溶于 0.1 mol/L pH 7.0 Tris-HCl 的 0.2 ml 0.5 mol/L 羟胺、0.01 mol/L EDTA，调整至 pH 7.0。30℃ 放置 4 min。将混合物过柱（交联葡聚糖）并用 0