用于基因传递的蛋白质纳米球：明胶纳米颗粒的制备和体外转染实验

实验分类：

其他实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

纳米颗粒被广泛用于克服药物传递的屏障。与合成高分子相比，天然高分子纳米颗粒具有一些明显优势。本章描述用生物髙分子明胶制备纳米粒的方法及相关的体外细胞培养实验，具体包括用乙醇去溶剂化制备纳米粒以及包载DNA时的注意事项。通过包裹一些电子密集性材料(如金纳米粒)并利用透射电子显微镜(TEM)进行观察可以示踪纳米颗粒在细胞内的行为。本章将介绍蛋白质纳米球包载金纳米颗粒的制备方法、细胞培养和TEM 样品的制备。同时，也将介绍一些细胞培养技术，来定性和定量分析包载DNA纳米球的转染效果。
作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」

来源：丁香实验

操作方法

明胶纳米颗粒的制备和 D N A 装载

明胶纳米颗粒的制备和 D N A 装载材料试剂乙醇 (200 proof) 明股 ( B 型, B l o o m strength 225) 甘氨酸 (0. lmol/L ) 醛 ( 4 0 % 戊二醛) 磷酸盐缓冲液 (P B S ) 配置 IL 的 PBS，在 9 〇〇ml的水中溶解 8 g 氯化钠、〇 • 2

细胞内示踪研究

细胞内示踪研究材料试剂待金纳米颗粒处理的细胞蒸馏去离子水 (d d H 20) 乙醇（200 proof) ( 3 0 % 、5 0 % 、7 5 % 、8 5 % 、％ % _1_0_0_~7_~B~2~0~2~0~0明胶（B 型，B l o o m strength 225) 戊二醛 (2. 5 % ，溶于 0. lmol/L 甲次砷

细胞转染和分析

细胞转染和分析材料试剂待转染细胞异丙醇（70%) 培养基：合适的细胞生长培养基和无血清培养基 Mounting m e d i u m (biomeda) 磷酸盐缓冲生理盐水（P B S ; 无菌）报道质粒 D N A (如 E G F P -I 、 C M V -( B) 台盼蓝 I X 胰蛋