细胞毒性T细胞表位的鉴定

实验分类：

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

细胞毒性 T 细胞表位的鉴定方法主要包括两种，一种是先获得抗原特异性 CTL 细胞克隆，再分别将蛋白质抗原的系列多肽片段与相应细胞（如 TAP 缺陷的人源性 T2 细胞、鼠源性 RMA-S 细胞等）一起孵育后用作靶细胞，通过检测 CTL 细胞克隆对靶细胞的细胞毒活性，鉴定出 CTL 表位。

抗原特异性 CTL 细胞克隆可以从肿瘤浸润淋巴细胞、淋巴结细胞或荷瘤机体外周血单个核细胞（PBMC）、病毒感染后机体的 PBMC、抗原（如蛋白质抗原、编码抗原或其片段的重组载体等）免疫后机体的淋巴结细胞或 PBMC 等中分离获得。抗原的系列多肽片段可根据抗原的氨基酸序列组成，采用表位预测的方法筛选、合成获得，或通过合成一定长度的交叠肽获得；也可以利用酸性缓冲液，将细胞表面 MHC I 类分子递呈的多肽洗脱下来，经分离、纯化后获得。

原理

细胞毒性 T 细胞表位的鉴定方法的基本原理是在对已鉴定 CTL 表位的氨基酸序列组成、CTL 细胞上 T 细胞受体（TCR）对表位多肽的识别与结合能力等数据分析基础上建立起来的，也是目前最常用的一种比较简单、快捷的 CTL 表位鉴定方法。

其基本流程是：先根据已知抗原的氨基酸序列组成，通过酸洗法、合成交叠肽或通过表位预测获得系列多肽片段，通过肽结合实验和肽结合竞争抑制实验测定多肽与 MHCI 类分子的亲和力进行初步筛选后，分别用筛选出的多肽体外刺激 PBMC，通过 CTL 杀伤力检测实验分析各多肽体诱导 PBMC 产生特异性 CTL 的能力，从而筛选、鉴定出 CTL 表位。

来源：丁香实验团队

操作方法

抗原特异性细胞毒性T细胞的获得

抗原特异性细胞毒性 T 细胞的获得是用「反向遗传学」方法鉴定 CTL 表位的第一步。

酸洗脱法获取抗原多肽（细胞毒性T细胞表位的鉴定）

酸洗脱法获取抗原多肽是指用一定强度的酸性缓冲液可将表位多肽和 β2M 从细胞表面洗脱下来，通过分离、纯化即可获得细胞天然表达的 CTL 表位多肽。

表位预测法获取抗原多肽（细胞毒性T细胞表位的鉴定）

表位预测法获取抗原多肽方法是指特定 MHC I 类分子或 MHC I 类分子家族所结合的 CTL 表位多肽的氨基酸组成有其特定的规律, 因此可以采用计算机预测的方法获取抗原多肽。