肿瘤细胞体外传代培养及保种

一、细胞复苏与培养 将液氮或-80℃保存的肿瘤细胞于37℃ 水浴, 快速溶化, 用8.0ml 培养基混匀已融化的肿瘤细胞悬液, 于1500 转/分, 离心3 分钟。弃上清, 再吸取8.0ml 培养基质混匀细胞沉淀, 再1500 转/分, 离心3 分钟, 弃上清, 细胞沉淀用1.0ml 培养基混匀, 备用。另取一个75cm2 方瓶, 加入14.0ml 培养基质, 将上述制备的含肿瘤细胞悬液(1.

在肿瘤研究中，使用来自患者的原代肿瘤细胞，能够体现肿瘤细胞系所缺乏的体内肿瘤微环境和原发肿瘤异质性的影响。使用人肿瘤解离试剂盒可以温和、快速、有效地从原发性人肿瘤组织生成单细胞悬液，高得率地获得肿瘤细胞、基质细胞和肿瘤浸润淋巴细胞（TIL），同时保留细胞表面表位。解离的细胞随后使用人肿瘤细胞分离试剂盒富集 untouched 肿瘤细胞，制备的细胞可进行细胞培养或直接用于生化、生理、药理和形态研究。

1. 酶溶液复溶：Enzyme H：每瓶冻干粉加入 3 mL RPMI 1640 或 DMEM 复溶。分装后 –20 °C 保存。若后续用于细胞培养，复溶后需先经无菌过滤再分装。Enzyme R：每瓶冻干粉加入 2.7 mL RPMI 1640 或 DMEM 复溶。分装后 –20 °C 保存。注：使用前须充分混匀该悬浊液！Enzyme A：每瓶冻干粉加入 1 mL 无菌去离子水复溶。勿涡旋。分装后