相互作用蛋白鉴定实验
蛋白质实验
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简介
通过确定与之结合的其他蛋白质来理解某种特定蛋白质的功能，常常是十分有用的方法。这可以通过从文库中选择或筛选与靶蛋白相互作用的新蛋白来实现。现有一种特别有用的方法即双杂交系统或相互作用阱， 用来测定新的相互作用蛋白，这种方法采用充当「试管」的酵母菌和一种报道系统的转录激活作用来识别结合蛋白。本方法也可以用来测试两个预测的具有相互作用的蛋白质之间是否形成复合物。
来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》
来源：丁香实验
操作方法
1. 应用标准的亚克隆技术（图 19.1.3），把编码目的蛋白的 DNA 插入到 pEG 202（见图 19.1.3）或别的 LexA 融合质粒中，建立融合蛋白读框。2. 把以下三组质粒分别用酸锂法转化到 EGY 48 中pBait+pSH18-34（实验）pSH17-4+pSH18-34（阳性对照）pRFHM1+pSH18-34（阴性对照）3. 把每个转化混合物放置在 Glu/CM-Ura、-H
鉴定诱饵蛋白（LacZ 的活性分析）1. 应用标准的亚克隆技术（图 19.1.3），把编码目的蛋白的 DNA 插入到 pEG202（见图 19.1.3）或别的 LexA 融合质粒中，建立融合蛋白读框。2. 把以下三组质粒分别用酸锂法转化到 EGY 48 中pBait+pSH18-34（实验）pSH17-4+pSH18-34（阳性对照）pRFHM1+pSH18-34（阴性对照）3. 把每个转化混合物放置在 Glu/CM-Ura、-Hi
相互作用蛋白捕获实验材料、试剂的准备请见「其他」。1. 将约 20 ml 含 LexA-操纵子-lacZ 表达质粒和 pBait 的酵母菌 EGY 48 或 EGY 191 培养液接种到 Glu/CM-Ura、-His 缺失成分液体培养基中，于 30℃ 培养过夜。2. 将培养液稀释到 300 ml Glu/CM-Ura、-His 缺失成分液体培养基中至浓度约为 2×106 细胞/ml（OD600 约 0. 10）
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