疏水作用层析法纯化蛋白质实验

实验分类：

蛋白质实验

最新修订时间：2022-10-10

简介

疏水相互作用层析是以介质疏水基团和蛋白质疏水区域间的亲和作用为基础的。疏水力是浸在一种极性液体（如水）中的非极性物质的排斥力。胞膜蛋白都具有一个明显的疏水区域以锚定在膜上。可溶性蛋白质在外表面上可能存在疏水小区，它促进蛋白复合物的形成，也可能是疏水配基结合部位或活性部位。这些暴露的疏水区对疏水层析纯化而言足非常理想的。尽管疏水层析利用相对非持异的亲和力分离纯化蛋白质，而且不具有高分辨率，但是该法很有用。

来源：《蛋白质技术手册》

来源：丁香实验

操作方法

疏水作用层析法

下述方案设定样品是在 75％硫酸铵沉淀后溶在 50％硫酸铵溶液的情况。1. 装填 5 ml 苯基琼脂糖 CL-4B 进入柱内；2. 10 倍柱床体积层析缓冲液（20 mmol/L，pH 7.0 磷酸钠盐，50％硫酸铵）洗柱；3. 调整样品液符合要求，即在 pH 7.0 磷酸钠缓冲液中含 50％硫酸铵。上样总蛋白量 200～500 mg；4. 3 倍柱床体积层析缓冲液洗柱或洗至 A280 值

疏水层析实验（HIC）

1．硫酸铵盐析取组织匀浆 30 g 溶于 60 ml 硫酸铵溶液（10%）中，搅拌溶解 4 小时，12000 g 离心 20 分钟；取上清液，缓缓加入硫酸铵粉末并不断搅动，使溶液达到 35% 的饱和度，常温静置 2 小时；12000 g 离心 20 分钟；取上清液，继续缓缓加入硫酸铵粉末并不断搅动，使溶液达到 70% 的饱和度，常温静置 2 小时。12000 g 离心 20 分钟，弃上清液，将沉淀