基于钙调素与荧光蛋白融合的钙指示剂实验

实验分类：

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

钙调素（CaM) 是普遍分布的蛋白质，参与钙介入的信号转导。当 Ca2+ 流入时，CaM 获得强亲和力，结合各种带有一个或多个CaM 识别序列的胞内蛋白，启动或终止 Ca2+ 调控的信号串联。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒编著。

来源：丁香实验

操作方法

基于钙调素与荧光蛋白融合的钙指示剂

本文中描述的方法涵盖了变色子在细菌及真核细胞里的克隆与表达（见 4.3.1 )，变色子的生物化学和生物物理特征鉴定（见 4.3.2 )，以及通过 FRET 技术将变色子用于体内 Ca2+ 成像（见 4.3.3 )。 3.1 变色子的克隆使用 5 个不同的部件：CFP、YFP、N-CaM、C-CaM 和 CRS，用标准的重组 DNA 方法 [8] 模块式组装钙变色子。 CFP 和 YFP 质粒