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        细胞电融合实验

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        目的要求
        使学生在了解电融合原理的基础上,学会掌握各种细胞悬液的制备及电融合过程的操作方法。

        实验原理
        游离的动物细胞或原生质体,置于电融合室中,在高频交流电场的作用下,细胞被极化,成为偶极子,造成细胞之间相互连接,如果施加的高频交流电压(既正弦波的P-P值)过高或作用时间过长,则细胞连接成串珠状,应适当控制以上条件,尽量是两细胞处于点接触状态;然后施加方波脉冲予以刺激,由于电脉冲的瞬间作用,可击破两细胞接触点部位的质膜,此时质膜脂类分子 发生重组,同时由于细胞表面的张力作用,使两细胞融合逐步完成。

        实验用品
        器材:JCF-1型细胞电融合仪、细胞融合池、普通离心机 、倒置显微镜(或研究用显微镜)刻度离心管、刻度吸管、小烧杯(10ml)等。
        试剂:甘露醇、蔗糖、氯化钠等。
        材料:鸡血。

        实验方法
        一、动物细胞的制备
        用灭菌的注射器先吸入Alsver液(葡萄糖2.05g,枸橼酸钠0.8g,NaCl 0.42g,加重蒸水100ml) 1ml,再从鸡的翼下静脉取血0.5~1ml,取出后放入刻度离心管中,再加入2~3ml Alsver液,使总量为4~5ml,混匀并封口,置于4℃冰箱内可供一周内使用。
        二、细胞电融合
        (1) 连接电源线插头至电源线插座。
        (2) 插入融合小室电极至电源线插座,将含有一定密度的动物细胞融合液加入融合小室内,将融合小室板放置倒置显微镜下,调正光距至细胞清晰。
        (3) 按下电源开关。
        (4) 用粗、中、细调调节成串脉冲所需频率300~400KHz,然后调节所需成串脉冲电压30~40V。
        (5) 调节融合脉冲脉宽,调节融合脉冲所需个数,选择好闸门时间(一般为“中”)
        (6) 调节融合脉冲电压至120~300V。
        (7) 同时按下成串脉冲及融合脉冲开关,此时在倒置显微镜中可观察到细胞移动并排列成串状。
        按下脉冲触发开关,可观察到细胞被电脉冲击穿,并与相邻的细胞发生融合。此时实验完成。取下融合小室,关闭电源。

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