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用亚氨基二乙酸(铁螯合)Sepharose6B 分离磷酸肽实验

实验分类:

蛋白质实验

最新修订时间:

简介

在进行蛋白质(phosphorylated protein) 的结构与功能分析时,接蛋白质水解后即能将磷酸肽与未修饰的(未磷酸化的)肽分开是很有助益的。可利用的最有效的方法之一是使用载有铁 (正铁离子)的金属螯合填料。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南,作者:朱厚础。

来源:丁香实验

操作方法

用亚氨基二乙酸(铁螯合)Sepharose6B 分离磷酸肽实验

材料与设备 Sepharose 6B 柱(1x6 cm;~5 ml), 含亚氨基二乙酸(铁螯合),(柱的理论容量为~2umol 的磷蛋白)(Pharmacia Biotech Inc.) Tris-HCl(50 mmoI/L;pH7.6), 含 EDTA(100 mmol/L) 和 NaCl(500 mmol/L) 氯化铁(50 mmol/L) 乙酸(0.1mol/L) 乙酸钠(0.1m

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