底物浓度对催化反应速度的影响及米氏常数Km 和最大反应速度Vmax的测定实验

实验分类：

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验是以蔗糖为底物, 利用一定浓度的蔗糖酶水解不同浓度的蔗糖所形成的产物( 葡萄糖和果糖) 的量来计算蔗糖酶的Km值。

来源：丁香实验

操作方法

二硝基水杨酸法

1. 本实验和下一个实验均采用二硝基水杨酸法测量反应产物还原糖, 为了掌握该法测定的范围, 可先作一条标准曲线。按下表进行实验操作: 用第1 管作空白对照, 测定其余各管520 nm 的吸光度A520 。用A520 值对还原糖的umole 数作图。 2. 按下面的表2测定不同底物浓度对催化速度的影响。为使Km 测准, 必须先加蔗糖, 精确移液