离子交换柱层析分离核苷酸实验

实验分类：

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验以酵母RNA 为材料, 将RNA 用碱水解成单核苷酸,再用离子交换柱层析进行分离, 最后采用紫外吸收法进行鉴定。旨在了解并掌握RNA 碱水解的原理和方法，掌握离子交换柱层析的分离原理和方法，熟练掌握紫外吸收分析方法。

来源：丁香实验

操作方法

离子交换层析法

1. RNA 的碱水解称取20 mg 酵母RNA, 置于刻度离心试管中, 加2ml 新配制的0.3 mol/ L KOH, 用细玻璃棒搅拌溶解, 于37 ℃ 水浴中保温水解20 h。然后用2 mol/ L HClO4 ( 过氯酸) 调水解液pH 至2以下( 要少量多次, 只需几滴即可) 。由于核苷酸在过酸的条件下易脱嘌呤, 所以滴加HClO4 时需用旋涡混合器迅速搅拌, 防止局部过酸, 再以