RNA 在脊椎动物的胚胎和器官中的整体标本原位杂交和检测实验

1) 如果有必要的话，在冰冷的PBS溶液中，使用合适的解剖器具在解剖镜下将小鼠或鸡的胚胎切成小块。完全除去胚胎外膜和胞衣。打开腔。2) 将样本转移到装有10 ml左右冷的4%多聚甲醛的20 ml咬合盖玻璃小瓶中。4℃固 定4 h到过夜。3) 4℃下用PBT洗样本两次。即使样本不做存储立即使用，也建议进行脱水、水化和漂白步骤（步骤4〜8)，这些步骤可以改进组织的浸透性并且增加方法的灵敏度。也可以选择

1) 从杂交过的小鼠胚或鸡胚或器官样本移除杂交溶液并加入800μL预杂交溶液A， 7℃洗 5 min。2) 不要移除预杂交溶液，向试管中再加入400μL 2×SSC, pH 4.5溶液，70℃洗 5 min,重复加2×SSC2次，并再洗2次。3) 移去混合液，并在0.1% CHAPS/2×SSC中70℃洗两次，每次洗30 min。4) 用含有20μg/ml RNA 酶 A 的 0.1% (V/V)

1) 在2%半胱氨酸，pH 7.8的溶液中培养非洲白化爪蟾的胚胎3〜10 min以除去胚胎外的胨胶层。2) 将胚胎转移到5 ml螺旋盖玻璃小瓶中，等胚胎沉淀后，移去大部分的液体，并向小瓶中加入MEMPFA缓冲液。室温下培养30 min并轻轻摇晃以固定胚胎。3) 用PBS取代MEMPFA缓冲液室温下洗3次，每次30 min。4) 依次用50%、70%和100%甲醇室温下使样本脱水，每种溶液浸泡10