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        酵母三杂交系统检测和分析 RNA- 蛋白相互作用实验

        实验分类:

        RNA 实验

        最新修订时间:

        简介

        酵母三杂交系统(yeast three-hybrid system)可用于分析蛋白质与 RNA 间的相互作用。在酵母三杂交系统中,RNA 蛋白质相互作用导致报道基因的转录,可以通过细胞生长、克隆颜色或特异的酶活性检测蛋白质与 RNA 的相互作用。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。

        来源:丁香实验

        操作方法

        筛选已知RNA序列的相互作用蛋白

        一、引入 RNA 质粒和 cDNA 文库 通常首先将 RNA 质粒转化到宿主菌株-L40coat 内,得到包含 RNA 质粒的细胞,再转化一个融合了转录激活区的 cDNA 文库(杂交 RNA 对宿主细胞几乎没有毒性,与用于双杂交筛选的一些杂交蛋白诱饵不同,所以,没必要将两个质粒共转染),转化混合物铺于缺乏亮氨酸和组氨酸的培养基上,不需要保持 RNA 质粒(如 ADE2 或者 URA3 选择)。这

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