RNase A/Tl 保护和 RNase H 聚焦法实验

RNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

基因分子鉴定的一个重要方面就是其 RNA 转录物 5' 和 3' 端的精确作图。首先被 Maniatis 研究组使用的 RNase 保护测定法就是基于这个目的发展起来的。由于杂交是在溶液中实现的，因此也称为溶液杂交。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。

来源：丁香实验

操作方法

RNase保护法

一、材料与设备 1. 水浴。 2. 垂直电泳装置。 3. 暗片盒。 4. X 射线片。 5. [ 32P ] 标记的探针：将探针溶于水中，浓度为 1~2 ng/μl。 6. 杂交混合液：80% 去离子甲酰胺，0.4 mol/L NaCl，40 mmol/L NaPIPESC（pH 6.8 )， 1 mmol/L EDTA。 7. RNase 消化缓冲液：300 mmol/L NaCl

RNase H 聚焦法

一、材料与设备 1. 水浴。 2. 垂直电泳装置。 3. 电转移装置。 4. 杂交管。 5. 杂交炉。 6. 暗片盒。 7. X 射线片。 8. 尼龙膜。 9. 工具酶：RNase A、RNase T1、RNase H 和蛋白酶 K。 10. 杂交缓冲液：40 mmol/L PIPES ( pH 6.4 )，1 mmol/L EDTA，0.4 mol/L NaCl，80% 甲