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        RNase A/Tl 保护和 RNase H 聚焦法实验

        实验分类:

        RNA 实验

        最新修订时间:

        简介

        基因分子鉴定的一个重要方面就是其 RNA 转录物 5' 和 3' 端的精确作图。首先被 Maniatis 研究组使用的 RNase 保护测定法就是基于这个目的发展起来的。由于杂交是在溶液中实现的,因此也称为溶液杂交。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。

        来源:丁香实验

        操作方法

        RNase保护法

        一、材料与设备 1. 水浴。 2. 垂直电泳装置。 3. 暗片盒。 4. X 射线片。 5. [ 32P ] 标记的探针:将探针溶于水中,浓度为 1~2 ng/μl。 6. 杂交混合液:80% 去离子甲酰胺,0.4 mol/L NaCl,40 mmol/L NaPIPESC(pH 6.8 ), 1 mmol/L EDTA。 7. RNase 消化缓冲液:300 mmol/L NaCl

        RNase H 聚焦法

        一、材料与设备 1. 水浴。 2. 垂直电泳装置。 3. 电转移装置 。 4. 杂交管。 5. 杂交炉。 6. 暗片盒。 7. X 射线片。 8. 尼龙膜。 9. 工具酶:RNase A、RNase T1、RNase H 和蛋白酶 K。 10. 杂交缓冲液:40 mmol/L PIPES ( pH 6.4 ),1 mmol/L EDTA,0.4 mol/L NaCl,80% 甲

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