引物延伸实验

PCR 技术

最新修订时间：2022-02-10

简介

引物延伸分析用于确定位置和定量特定RNA的5'-端的数量。结束标记的寡核苷酸杂交，RNA和利用中存在的脱氧核苷酸逆转录作为底漆。因此RNA的反转录成cDNA，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。cDNA的长度反映了基地之间的标记引物和RNA的5'-端核苷酸的数量，基因产品的数量是针对性的RNA的量成正比。

来源：丁香实验

操作方法

引物延伸实验

1. 依次加入下列试剂，建立用以标记引物的反应混合液（终体积10 μl）（1）2.5 μl H2O （2）1 μl 10×T4多核苷酸激酶缓冲液（3）1 μl 0.1 mol/l DTT （4）1 μl 1 mol/l 亚精胺（5）1 μl 50~100 ng/μl 挂核苷酸引物（6）3 μl 10 μCi/μl［γ-32P］ATP （7）0.5