长距离 PCR

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

在标准 PCR 反应条件下，PCR 扩增 DNA 片段的长度一般为 1~2 kb，这种扩增能力对许许多多常规的 DNA 分子操作技术要求来说是已经足够了（如 DNA 序列分析和基因突变等)，但是对于扩增某些大的完整的哺乳动物基因组基因，这种 PCR 扩增能力还是远未达到实验要求的。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

长距离PCR

一、材料 1. 缓冲液与溶液氯仿 4 种 dNTP 贮存液（20 mmol/L，pH 8.0) 10X 长距离 PCR 缓冲液（500 mmol/L Tris-Cl ( pH 9.0，室温），160 mmol/L 硫酸铵，25 mmol/L MgCl2，1.5 mg/ml 牛血清白蛋白） 2. 酶与缓冲液热稳定 DNA 聚合酶混合液 3. 凝胶琼脂糖凝胶 4. 核苷酸与寡核