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用大肠杆菌 Klenow 片段标记合成的寡核苷酸实验
实验分类：
DNA 实验
最新修订时间：
简介
通常利用 T4 噬菌体多核苷酸激酶催化的磷酸化反应进行寡核苷酸的标记。但有时需要标记比活度更高的放射性标记的探针，最理想的情况下，磷酸化反应中每一个寡核苷酸分子上有一个 32P 原子掺人。而用大肠杆菌 DNA 聚合酶 IKlenow 片段合成与寡核苷酸互补的一条 DNA 链，可获得更高比活度的探针。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）上册，作者：黄培堂。
来源：丁香实验
操作方法
材料 溶液和缓冲液 稀样贮存液至适当浓度。 甲酰胺加样缓冲液 10XKlenow 缓冲液 酶与缓冲液 大肠杆菌 DNA 聚合酶 IKlenow 片段 凝胶 变性聚丙烯酰胺凝胶 丙烯酰胺在凝胶溶液中的比例及电泳条件，依反应混合液中寡核苷酸的大小不同而异，表 10-4 列出一些有用的提示： 聚丙烯酰胺凝胶通常用 lxTBE(89 mmol/LTris-硼酸，2 mmol/LEDTA)
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