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        M13 噬菌体双链(复制型)DNA 的制备

        实验分类:

        DNA 实验

        最新修订时间:

        简介

        感染 M13 噬菌体的细菌含病毒双链 RF DNA,培养基中粗提病毒颗粒中含单链子代 DNA,双链 RF DNA 可以采用类似于质粒纯化的方法从感染细胞的小量培养物中分离。从 1~2 ml 的感染细胞培养物中可以分离几微克的 RF DNA,这个量足以进行亚克隆和作限制酶酶切图谱。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

        来源:丁香实验

        操作方法

        M13噬菌体双链(复制型)DNA的制备

        一、材料 1. 缓冲液和溶液 碱裂解液Ⅰ 碱裂解液Ⅱ 碱性裂解液Ⅲ 乙醇 酚:氯仿(1:1,V/V) 含 20 μg/ml Rnase A 的 TE ( pH 8.0)。 2. 酶和缓冲液 限制性内切核酸酶 3. 凝胶 琼脂糖凝胶(0.8%) 悬于 0.5 X TBE,含 0.5 μg/ml 溴化乙锭 4. 载体和菌株 感染了 M13 噬菌体的大肠杆菌培养物 二、方法

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