Southern 印迹实验

一、向上毛细管转移法的转移叠层系统： 图一、向上毛细管转移法的转移叠层系统，A表示海绵法，B表示滤纸桥法 二、实验步骤 1. 用适当的限制性内切酶消化DNA，与合适的DNA分子量标准一起进行琼脂糖凝胶电泳。 2. 用溴化乙锭染色，在凝胶的侧沿放一把直尺进行照相，便于以后识别电泳带在膜上的位置。 3. 按如下方法处理凝胶，室温下轻轻摇动，要确保凝胶被完全覆盖。

1. 印迹法中步骤1和歩骤2中所述准备凝胶及用0.25 mol/l HCl处理。 2. 用蒸馏水漂洗凝胶，并用10倍体积的0.4 mol/l NaOH变性，缓慢摇动20 min。 3. 用0.4mol/l NaOH替代20xSSC作为转移液进行转印。转印时间≥2 h。 4. 取出膜，用2xSSC漂洗，置于一张Whatman 3 MM 滤纸上晾干，保存于室温。

一、实验步骤 1. 按印迹法步骤1~4（高盐转移）所述处理凝胶。 2. 如下图所示，安装转移塔，其组成依次为 （1）置于一玻璃平皿中的纸巾塔（1~3 cm 高），4张Whatman 3 MM 滤纸，第5张滤纸用转移缓冲液浸湿。 （2）用蒸馏水润湿的尼龙膜或用20xSSC润湿的硝酸纤维素膜，塑料薄膜，凝胶。 （3）3张Whatman 3 MM滤纸，2 张较大的预先用转移缓冲液润湿的Wha

1. 在非变性或变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳DNA样品。 2. 电泳将近结束时，将一张大小足以覆盖凝胶中相应部分的尼龙膜漂浮于蒸馏水表面，然后浸入水中泡5 min。 3. 从电泳装置中取去一块玻璃板，染色后对凝胶进行照相（如果是非变性胶）在凝胶的表面铺一张Whatman 3 MM 滤纸，排去其间的所有气泡。 4. 揭起滤纸将凝胶剥离玻璃板。 5. 将2块Scotch-Brite垫浸泡于0.5