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- EK-Bioscience
- MY9003
- 2025年07月14日
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丁香果 请问miRNA表达载体与luciferase载体共转，分别用哪个载体比较好？ 之前用软件预测到多个可调控靶序列的miRNA，现在想要确定究竟是哪个真的有作用，构建miRNA表达载体又比较费时，有买过miRNA表达载体能否可以推荐一下? zhujoker miRNA表达载体文献上报道的是比较多，现在主要趋向于用慢病毒载体来表达miRNA。如果你需要直接买已经构建好的的miRNA表达质粒，这是很贵的，几乎都是慢病毒载体
tutufei miRNA如何构建到慢病毒载体？与基因构建到质粒载体有何区别吗？最好有具体的实验步骤，或相关资料，不胜感激！ 大鹏鸟 本质上没啥区别的。 步骤： 1、设计好premiRNA----带有相应酶切位点 2、化学合成 3、退火形成双链 4、连接到相应载体 5、转化感受态， 6、酶切或者PCR鉴定,测序 7、扩增阳性质粒，包装慢病毒，进行细胞学实验
【求助】关于克隆包含pri-miRNA的基因组片段到表达载体来表达miRNA的问题
zwmc 很多文章使用这种方法来表达miRNA, 而且我在论坛上看到很多坛友也比较推崇这个方法。但是我最近遇到了问题：我想要克隆表达的miRNA具有5p和3p两种剪切形式，理论上我把包含该pri-miRNA的基因组片段到表达载体在细胞里表达之后，这种情况下我表达出来的miRNA是兼有5p 3p两种形式？或者是只有一种呢？ 很困惑，请大家不吝赐教！ 吴佰霖 1. 查文献，看这个miRNA的5p和3p是否都有表达
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