
供荧光素酶底物-D-荧光素钾盐
- ¥1800
- Goldbio
- USA
- 1001010818
- 2025年07月15日
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- 文献和实验
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- 英文名:
D-luciferin potassium
- 库存:
大量
- 供应商:
上海必鼎它生物
- CAS号:
115144-35-9
- 保存条件:
≤-20°C,避光,保持干燥。
- 规格:
mg
化学名称:4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid potassium salt
CAS 号:115144-35-9
分子式:C11H7N2O3S2K
分子量:318.42 g/mol
纯 度:99.7 %(HPLC)
D-Luciferin 作为荧光素酶的底物,存在于多种发光生物体中。在ATP和荧光素酶的催化作用下,Luciferin被氧化,产生蓝绿色的光(560nm),当底物过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关。编码荧光素酶的Luc基因是植物、细菌、哺乳动物细胞的常用报告基因。由于没有背景干扰,因此可以很容易地检测出低至 0.02 pg水平的荧光素酶。
保存和运输:-20℃保存,4℃运输。
产品有效期:12个月。
Application / 应用
1.In vitro分析
2.In vivo分析(活体成像)
3.高灵敏度ATP分析
Protocol for In vivo analysis / 活体成像分析方法
1.用DPBS(w/o Mg2+、Ca2+)配置D-luciferin工作液(15mg/mL)* ,0.2 um滤膜无菌过滤。
2.注射量:10μL/g的体重,如10 g重小鼠,注射100μL储备液(1.5 mg Luciferin)。
3.腹腔注射 (i.p.) 10-15分钟后,上机进行图像分析。
Protocol for In vitro analysis / 体外分析方法
1. 用无菌水配置200×储备液(30mg/ml)*,立即使用,或-20℃保存。
2. 用预热好的完全培养基1∶200稀释Luciferin储备液,配置工作液(150μg/mL)。
3. 去除培养细胞的培养基。
4. 进行图像分析前,向细胞中添加1×的Luciferin工作液,进行图像分析。
注意事项:
D-luciferin potassium原装(没有打开包装)荧光素的包装瓶中充有氩气,保证其稳定性,打开包装后,请严格按照保存条件保存。
D-荧光素钾盐具有易溶于水的特性,其暴露于空气中,易吸潮。在称量过程中,请考虑其易吸潮的特性,先进行温度平衡,再快速称取。
-荧光素配成溶液后,在最佳的保存条件(-80°C,最佳pH,无氧气)下,存在固定的降解速度:0.2%/天,因此配成溶液保存的D-荧光素应尽量在1年内使用完。
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文献和实验荧光素酶的发光是酶促反应产生的自发光,不需要激发光,但需要底物荧光素。不同的荧光素酶所需的底物不同。例如,萤火虫荧光素酶的底物是 D-荧光素,海肾荧光素酶的底物是腔肠素。其中,D-荧光素的使用频率最多,荧光素在氧气、ATP 存在的条件下和荧光素酶发生反应,生成氧化荧光素,并产生发光现象。 目前市场上 D-荧光素主要有三种形式,D-荧光素(游离酸)、D-荧光素(钠盐)和 D-荧光素(钾盐)。这三种形式主要区别在于溶解特性,配成溶液后,其在绝大多数应用上都没有实质性的差别,整体来看,钾盐在活体
min。②荧光素的准备 根据欲标记的蛋白质总量,按每毫克免疫球蛋白加0.01mg荧光色素,用分析天平准确称取所需的异硫氰酸荧光素粉末。也可用下述公式计算出免疫球蛋白、荧光素的量,还可以算出需加缓冲液的量。a.蛋白溶液:含量Amg/m1;容积Bml。b.总蛋白量(AXB)=Crag。c.C/20~C/10=Dmg(如蛋白含量低于20mg/ml,用C/10;如高于20mg/ml,用C/20)。d.荧光素FITC的量:(1/50~2/100)XC=Emg。e.巳0.5mol/L(pH9.5)碳酸盐缓冲
,使其折叠成正确的构象,成为pMHC复合物。将生物素标记在底物肽的赖氨酸残基上,使得一个标记荧光素的链亲和素与四个生物素标记的pMHC复合物结合形成四聚体,MHC-抗原肽四聚体与抗原特异性CFI-上的TCR结合后,即可以通过流式细胞仪定量检出体内抗原特异性CTL,并能将其分选出以供体外培养扩增和功能分析之用。 四聚体技术使抗原特异性CTI-活性检测达到特异、高效和直接定量的程度,可应用于免疫学研究和检测、特异性免疫治疗以及疫苗疗效监测等多个方面。
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