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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 规格:
共400ml
碧云天生产的Western溶液套装(封闭液、洗涤液、一抗和二抗稀释液),是一种包含了Western Blot实验过程中常用的封闭液、洗涤液、一抗和二抗稀释液的溶液套装。
本产品中的一抗稀释液(Primary Antibody Dilution Buffer for Western Blot) 可以用于Western时一抗(primary antibody)的稀释和配制。其主要有效成分为经过反复优化的适量BSA、适当的去垢剂和一抗稳定试剂等,一方面能有效减少一抗的非特异性结合,另一方面能有效提升稀释后一抗的稳定保存时间。使用本Western一抗稀释液稀释和配制的一抗可以在4℃保存和使用不少于六个月,可以反复多次用于Western,节约您宝贵的抗体。
本产品中的Western封闭液(Blocking Buffer for Western Blot) 可以用于Western时转移了蛋白样品的PVDF膜或NC膜的封闭。其主要有效成分为经过反复优化的适量BSA和适当的去垢剂等,一方面能有效封闭膜上的蛋白结合位点,另一方面能有效减少后续一抗和二抗的非特异性结合。使用本Western封闭液封闭后,可以减小后续的一抗或二抗和膜的非特异性结合,降低背景,增强信噪比。
本产品中的Western洗涤液(10X)可以用于Western时一抗或二抗孵育后的洗涤。适当的洗涤可以降低背景,增强信噪比。
本产品中的Western二抗稀释液(Secondary Antibody Dilution Buffer for Western Blot) 可以用于Western时二抗(secondary antibody)的稀释。其主要有效成分为经过反复优化的适量BSA、适当的去垢剂和二抗稳定试剂等,一方面能有效减少二抗的非特异性结合,另一方面能有效提升稀释后二抗的稳定保存时间。经本Western二抗稀释液稀释的二抗可以在1-2周内重复使用3-5次。
按照每次Western blot需要封闭液10ml、一抗稀释液10ml、二抗稀释液10ml、洗涤液10ml+30ml+30ml+10ml=80ml,约100ml计算,一个包装的本试剂盒,大约可以进行10次Western Blot检测。
包装清单:
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| P0023A-100ml | Western一抗稀释液 | 100ml |
| P0023B-100ml | Western封闭液 | 100ml |
| P0023C3 | Western洗涤液(10X) | 100ml |
| P0023D-100ml | Western二抗稀释液 | 100ml |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件:
4℃保存,一年有效。长期不适用可以-20℃保存。
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文献和实验组织边缘 2 mm。 Q10:灶片状着色,如何调整? (1)洗涤液的残留:洗涤液的残留可能导致其对后续试剂产生稀释作用,需尽量甩干样本残余洗涤液。 (2)坏死组织灶,组织坏死后细胞破坏、酶的释放、蛋白游离、分解,复杂的肽链残段可能与一抗或/和二抗结合影响最终着色,因此在选择染色切片时应避免选择坏死组织较多的切片。 附实验小 Tips
封闭及杂交 在做杂交时,个人建议:还是使用杂交袋进行一抗和二抗的孵育,这样节约抗体。 操作开始: 1. 将膜用 TTBS 从下向上浸湿后,移至含有封闭液的平皿中,室温下脱色摇床上摇动封闭 1 h。必要时可先用丽春红染色(2%乙酸,0.5%丽春红的水溶液)观察蛋白条带,再用去离子水和 TTBS 将丽春红洗脱后封闭,如用蛋白 marker 则可省略此步。 2. 将一抗用 PBST 稀释至适当浓度(在 1.5 ml 离心管中);撕下适当大小的一块儿保鲜膜铺于实验
【原创】暗室实验(化学发光底物检测方法)及Western Blot实验优化方法
检测;再次检测结果仍为阴性,证明底物丧失活性。 暗室实验结果阳性: 认为二抗及底物活性良好; Western Blot 系统需要进一步优化 优化抗原和抗体浓度的斑点杂交方法:斑 点 杂 交 方 法——优 化 抗 原 和 抗 体 浓 度 对于一个给定的抗原,最佳的抗体浓度依赖的抗原和抗体本身。抗原和抗体的亲和力,以及一抗与二抗的特异反应都是不同的。最优抗原和抗体浓度可通过免疫印迹实验中使用不同浓度的抗原和抗体作用确定。另外,更快和更简单的方法是进行斑点印迹实验。以下是使用超敏感信号底物进行
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