碧云天生产的T4 DNA Polymerase,即T4 DNA聚合酶,是一种模板依赖的DNA聚合酶,可以在单链DNA模板和与其配对的引物存在的条件下,催化5'→3'方向的DNA合成。T4 DNA Polymerase具有3'→5'外切酶活性,但不具有5'→3'外切酶活性。
T4 DNA Polymerase具有比DNA聚合酶I更强的3'→5'核酸外切酶活性,因此该酶是高保真的DNA聚合酶;与大肠杆菌DNA聚合酶I不同的是,T4 DNA聚合酶不具有5'→3'核酸外切酶活性。
T4 DNA Polymerase由于同时具有5'→3'DNA聚合酶活性和3'→5'DNA外切酶活性,可以用于将5'端突出末端补平或3'端突出末端削平。T4 DNA Polymerase的3'→5'DNA外切酶活性对于单链DNA要比双链DNA活性更高,即单链DNA要比双链DNA中的非配对链部分更容易被T4 DNA Polymerase所消化。T4 DNA Polymerase的3'→5'外切酶活性比Klenow Fragment要高约上百倍。
碧云天生产的T4 DNA Polymerase催化5'端突出末端补平的效果请参考图1。
图1.碧云天生产的T4 DNA Polymerase催化5'端突出末端补平的效果图。使用本产品或N公司(Competitor)的T4 DNA Polymerase,在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或N公司的T4 DNA Polymerase,12℃孵育15min进行反应,反应完毕后冰浴3-5min,75℃孵育20min以终止反应。取5μl反应产物,加入1μl 6X DNA Loading Buffer,然后进行15%native-PAGE电泳。180V电泳60min,之后用D0130 NA-Red (EB升级换代产品,2000X)室温染色15min,观察实验结果。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的催化效果。反应体系(20μl):10mM Tris-HCl (pH7.9 at 25℃), 50mM NaCl, 10mM MgCl2, 1mM DTT, 125µM dNTP Mix, 0.5µM Template/Primer (Template:5'-ATACATAGATACATAGACTGGCCGTCGTTTTAC-3';Primer:5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3');Primer和Template按照D0251产品说明书中推荐的程序进行退火反应,之后以Primer/Template退火产物为底物,进行5'端突出末端的补平。
用途:DNA 5'或3'突出末端的平滑化和平端克隆;通过置换反应进行标记DNA探针合成;定点突变过程中第二链的合成;不依赖于连接反应的PCR产物克隆;通过引物延伸法分析mRNA转录的起始点。
来源:T4 DNA聚合酶由大肠杆菌表达纯化而来,表达基因为T4噬菌体基因43。
活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10nmol dNTP into acid insoluble material in 30 minutes at 37℃.
纯度:不含DNA内切酶,不含RNase。
酶储存液:100mM potassium phosphate (pH6.5), 1mM DTT, 50%甘油。
10X Reaction Buffer: 100mM Tris-HCl (pH7.9 at 25℃), 500mM NaCl, 100mM MgCl2, 10mM DTT。
失活或抑制:75℃加热20min可使T4 DNA聚合酶充分失活;金属离子螯合剂可以抑制T4 DNA聚合酶的活性。
包装清单:
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
D7052S-1 |
T4 DNA Polymerase (3U/µl) |
50µl |
D7052S-2 |
10X T4 DNA Polymerase Reaction Buffer |
300µl |
- |
说明书 |
1份 |
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
D7052M-1 |
T4 DNA Polymerase (3U/µl) |
250µl |
D7052M-2 |
10X T4 DNA Polymerase Reaction Buffer |
1.5ml |
- |
说明书 |
1份 |
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
D7052L-1 |
T4 DNA Polymerase (3U/µl) |
1ml |
D7052L-2 |
10X T4 DNA Polymerase Reaction Buffer |
6ml |
- |
说明书 |
1份 |
保存条件:
-20℃保存。