碧云天生产的E. coli Poly(A) Polymerase,即E. coli Poly(A)聚合酶,也称E. coli PAP、PAP酶、Poly(A)加尾酶或PolyA加尾酶,能以不依赖于模板的方式催化由ATP转化成的AMP添加到单链RNA的3’末端,以形成Poly(A)尾。E. coli Poly(A)聚合酶能以各种单链RNA作为底物RNA,但双链RNA及过短的寡核苷酸不推荐作为该反应的RNA底物,并且DNA不能作为该反应的底物。实测15nt合成的RNA完全可以作为E. coli Poly(A) Polymerase的底物,在ATP存在时催化形成Poly(A)尾的。E. coli Poly(A) Polymerase催化的Poly(A)加尾反应只能使用ATP,而不能使用ADP或dATP。另外,使用CTP和UTP时,其掺入量不足使用ATP时的5%;而使用GTP时,其完全不能添加到RNA的3'末端。
碧云天生产的E. coli Poly(A) Polymerase对单链RNA加Poly(A)尾的效果参考图1。
图1. 碧云天生产的E. coli Poly(A) Polymerase与同类产品(Competitor)对单链RNA加Poly(A)尾的对比效果图。在20µl反应体系(50mM Tris-HCl, pH8.1, 250mM NaCl, 1mM ATP, 10mM MgCl2)中,加入人工合成的0.5µg 22nt的单链RNA,以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的E. coli Poly(A) Polymerase,37℃孵育30min,65℃孵育20min终止反应。取出5μl反应后的产物,加入1μl 6X DNA Loading Buffer (D0071),95℃变性3min,然后进行含7M Urea的15%PAGE。室温条件下用1X TBE作为电泳液,180V电泳90min,NA-Red (D0128) 1:1000稀释后室温染色30min,然后拍照观察。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的对单链RNA加Poly(A)尾的效果。
用途:用放射性同位素标记的ATP或虫草素(cordycepin)标记RNA;为RNA添加Poly(A)尾,用于反转录后克隆或亲和纯化;增加mRNA的稳定性,从而提高转染至真核细胞中的RNA的翻译效率。
来源:重组E. coli菌株,携带克隆自大肠杆菌的Poly(A)聚合酶基因。
活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 1nmol of AMP into RNA in a 20µl volume in 10 minutes at 37℃.
纯度:不含DNase、RNase和磷酸酯酶。
酶储存液:20mM Tris-HCl (pH7.5, 25℃), 500mM NaCl, 1mM DTT, 1mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100.
10X Reaction Buffer:500mM Tris-HCl (pH8.1, 25℃), 2.5M NaCl, 100mM MgCl2.
失活或抑制:加入EDTA至终浓度为10mM,或65℃加热20min。
包装清单:
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
R7070S-1 |
E. coli Poly(A) Polymerase (5U/µl) |
20µl |
R7070S-2 |
10X PAP Reaction Buffer |
50µl |
R7070S-3 |
10mM ATP |
50µl |
— |
说明书 |
1份 |
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
R7070M-1 |
E. coli Poly(A) Polymerase (5U/µl) |
100µl |
R7070M-2 |
10X PAP Reaction Buffer |
250µl |
R7070M-3 |
10mM ATP |
250µl |
— |
说明书 |
1份 |
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
R7070L-1 |
E. coli Poly(A) Polymerase (5U/µl) |
500µl |
R7070L-2 |
10X PAP Reaction Buffer |
1.25ml |
R7070L-3 |
10mM ATP |
1.25ml |
— |
说明书 |
1份 |
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
R7070XL-1 |
E. coli Poly(A) Polymerase (5U/µl) |
2ml |
R7070XL-2 |
10X PAP Reaction Buffer |
5ml |
R7070XL-3 |
10mM ATP |
5ml |
— |
说明书 |
1份 |
保存条件:
-20℃保存,至少两年有效。