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ATP合酶酶活测定试剂盒

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  • ¥1920
  • 齐源
  • QYS-23020
  • 国产
  • 2025年09月06日
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      999

    • 英文名

      ATP synthase activity assay kit

    • CAS号

      微信号19512293839

    • 保质期

      qq1300030701

    • 供应商

      齐源生物

    • 保存条件

      2-8℃低温保存

    QYS-23020 ATP合酶酶活测定试剂盒 微量法 100管/48样 
    QYS-23021 ATP合酶酶活测定试剂盒 可见分光光度法  25管12样
    测定意义:
    线粒体复合体Ⅴ又称F1F0-ATP合酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中, 由F1和F0两个亚单位组成。该酶利用呼吸链产生的质子电化学梯度催化ATP合成,也可逆过程水解ATP。此外,复合体Ⅴ还存在于叶绿体、异养菌和光合细菌中。复合体Ⅴ是线粒体氧化磷酸化和叶绿体光合磷酸化合成ATP的关键酶。 
    测定原理:
    复合体Ⅴ水解 ATP 产生 ADP 和 Pi,通过测定 Pi 增加速率来测定复合体Ⅴ活性。
    需自备的仪器和用品:
    可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
    试剂的组成和配制:
    试剂一:100mL×1 瓶,-20℃保存; 
    试剂二:80mL×1 瓶,-20℃保存; 
    试剂三:2 mL×1 瓶,-20℃保存;
    试剂四:粉剂×1 支,-20℃保存;临用前加入 2mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍
    -20℃保存;
    试剂五:8mL×1 瓶,4℃保存;
    试剂六:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 4mL 蒸馏水,充分混匀;溶解后 4℃保存一周; 
    试剂七:粉剂×1 瓶, 4℃保存;临用前加入 10mL 蒸馏水,充分混匀;溶解后 4℃保存一周; 
    试剂八:粉剂×1 瓶, 4℃保存;临用前加入 10mL 蒸馏水,充分混匀;溶解后 4℃保存一周; 
    试剂九:液体 10mL×1 瓶,室温保存。
    定磷试剂的配制:按 H2O: 试剂七:试剂八:试剂九=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷试剂应
    为浅黄色。若无色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染(请根据需要,用多少配多少)。
    注意:配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器,或者一次性塑料器皿,以避免磷污染。
    样本的前处理:
    组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:
    ①    准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
    ②    将匀浆 600g,4℃离心 5min。
    ③    弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心 10min。
    ④    上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白,可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅴ(此步可选做)。
    ⑤    步骤④中的沉淀即为线粒体,加入 800uL 试剂二和 8uL 试剂三,超声波破碎(冰浴, 功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10 秒,重复 30 次),用于复合体Ⅴ酶活性测定。
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