植酸酶（phytase）试剂盒

植酸酶（phytase）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/24 样注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义
植酸酶（phytase）是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸（盐）的一类酶的总称，属磷酸
单酯水解酶，它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷，降低粪便中的磷含量，减轻对环境的污染，改善营养成分的吸收和利用，因此具有极其广泛的研究和应用价值。

测定原理

植酸酶在一定温度和 pH 值条件下，水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物，无机磷在酸
性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物，在 700nm 处有特征吸收峰，根据 700nm 处吸光值变化可计算得植酸酶活性。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅，超声溶解器，回旋
式振荡器。

试剂组成和配制

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
缓冲液：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存，临用前加缓冲液 10mL 配制，现用现配；用不完的试剂 4℃ 保存一个月。
试剂二：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。
显色剂：粉剂×6 瓶，4℃保存，临用前根据用量每瓶加 1mL 双蒸水溶解，再加 4mL 试剂二混匀。

样本处理

1. 酶制剂：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：500~1000 的比例（建议称取约 0.001g，

加入 1mL 提取液）加入提取液，在超声波溶解器上溶解 15min，再用回旋式振荡器振荡15min，待测。

2. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL提取液）进行冰浴匀浆，在超声波溶解器上溶解 15min，再用回旋式振荡器振荡 15min， 4℃，4000g 离心 10min，取上清待测。
3. 饲料样品：饲料烘干粉碎，过 40 目筛，按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，在超声波溶解器上溶解 15min，再用回旋式振荡器振荡 15min，4℃，4000g 离心 10min，取上清待测。
4. 培养液等液体样品，混匀直接测定。

对照管 测定管 样本（µL） 100 100 37℃温育 5min 缓冲液（µL） 400   试剂一（µL）   400 混匀，37℃温育 30min 95℃，10min 终止反应，冷却至室温

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测定操作表