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- XK-SJH-A510
- 国产
- 2025年07月18日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
β-1,3-Glucanase (β-1,3-GA) test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/48样
β-1,3 葡聚糖酶（β-1,3-glucanase，β-1,3-GA）试剂盒
微量法 100 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：
β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化 β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成 β-1,3-GA，因此 β-1,3-GA 活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。测定原理：
β-1,3-GA 水解昆布多糖，内切 β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率来计算其酶活性。自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 2mL 蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂 4℃ 保存；
试剂二：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 12000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入
1mL 提取液），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 550nm，蒸馏水调零。2、样本测定（在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂）：
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 |
| 样本 | 35 | 35 |
| 蒸馏水 | 35 | |
| 试剂一 | 35 |
| 试剂二 | 230 | 230 |
（计算公式乘以相应稀释倍数），ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需设一个对照管。
相关图片：
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
2、血清（浆）β-1,3-GA 活力的计算
单位的定义：每 mL 血清（浆）每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(mg/h/mL)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷V1=10.438×(ΔA +0.0192)
3、细胞、细菌和组织中 β-1,3-GA 活力的计算
- 按蛋白浓度计算
β-1,3-GA(mg/h/mg prot)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958 ×V1]÷(V1 ×Cpr)=10.438 ×(ΔA +0.0192)
÷Cpr
- 按样本鲜重计算
β-1,3-GA(mg/h/g 鲜 重 )=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(W×V1÷V2)= 10.438×(ΔA +0.0192)
÷W
- 按细菌或细胞密度计算
β-1,3-GA(mg/h /104 cell)= [( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0208×(ΔA+0.0192)
V1：加入反应体系中样本体积，0.035mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
- 用 96 孔板测定的计算公式如下
2、血清（浆）β-1,3-GA 活力的计算
单位的定义：每 mL 血清（浆）每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(mg/h/mL)=[( ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷V1=20.876×(ΔA +0.0192)
3、细胞、细菌和组织中 β-1,3-GA 活力的计算
- 按蛋白浓度计算
β-1,3-GA(mg/h/mg prot)= [(ΔA +0.0192)÷0.0479 ×V1]÷(V1 ×Cpr)=20.876 ×(ΔA +0.0192)
÷Cpr
- 按样本鲜重计算
β-1,3-GA(mg/h/g 鲜 重 )= [(ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(W×V1÷V2)= 20.876×(ΔA +0.0192)
÷W
- 按细菌或细胞密度计算
β-1,3-GA(mg/h /104 cell)= [( ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0416×(ΔA+0.0192)
V1：加入反应体系中样本体积，0.035mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
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文献和实验超声破碎法；④ 酶溶法；⑤ 化学渗透等。前三种方法属机械破碎法，并且方法① 、② 已在工业生产中得到应用，后三种方法在实验室研究中应用较为广泛。下面介绍酶溶法和超声破碎法的实验步骤。（1）酶溶法。常用的溶解酶有溶菌酶；β-1,3 -葡聚糖酶；β-1,6 -葡聚糖酶；蛋白酶；壳多糖酶；糖昔酶等。溶菌酶主要对细菌类有作用，而其他几种酶对酵母作用显著。主要步骤为：① 4 ℃ ，5000rpm 离心，15 min ，收集诱导表达的细菌培养液（100 ml ）。弃上清，约每克湿菌加3 ml 裂解缓冲液，悬浮
几乎所有的赤霉素，在提取时，从乙酸乙酯的酸可溶性部分中所得到的都是游离型赤霉素。也有一些赤霉素是以与其他分子相结合的形态而存在，对这种类型的赤霉素，总称为结合型赤霉素（ bound或 conjugated gibberellin）。对葡糖配糖体（例如 3-O-β -葡糖基 GA3 ）和葡糖酯（ GA4 葡糖酯）可以进行分离鉴定。前者为极性大的水溶性物质，可用 n-丁醇提取；后者被认为是中性赤霉素（ neutral gibberellin
的裂解 常用方法有：① 高温珠磨法；② 高压匀浆；③ 超声破碎法；④ 酶溶法；⑤ 化学渗透等。前三种方法属机械破碎法，并且方法① 、② 已在工业生产中得到应用，后三种方法在实验室研究中应用较为广泛。下面介绍酶溶法和超声破碎法的实验步骤。 （1）酶溶法。常用的溶解酶有溶菌酶；β-1,3 -葡聚糖酶；β-1,6 -葡聚糖酶；蛋白酶；壳多糖酶；糖昔酶等。溶菌酶主要对细菌类有作用，而其他几种酶对酵母作用显著。主要步骤为： ① 4 ℃ ，5000rpm 离心，15 min ，收集诱导
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