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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
Glycogen content test kit
- CAS号:
无
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
100管/96样

糖原含量试剂盒说明书
微量法 100 管/96 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:
糖原是由葡萄糖单位构成的高分子多糖,是糖的主要的储存形式之一,主要贮存在肝和肌肉中作为备用能量,分别称为肝糖原和肌糖原。肝糖原可调节血糖浓度,当血糖升高时可在肝脏合成糖原,血糖降低时,肝糖原则分解为葡萄糖以补充血糖。因此,肝糖原对维持血糖的相对平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的储存形式,在剧烈运动消耗大量血糖时,肌糖原不能直接分解成血糖,必须先分解产生乳酸,随血液循环到肝脏,通过糖异生转变为肝糖原或葡萄糖。测定原理:
蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原,在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量。需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、浓硫酸(不允许快递)和蒸馏水。试剂的组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;试剂一:0.1mg/mL 的葡萄糖标准液 10mL×1 瓶,4℃保存; 试剂二:粉剂×1 瓶, 4℃保存;
糖原提取:
1﹑细胞或细菌:收集 500~1000 万细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;加入 0.75mL 提取液超声波破碎细菌或细胞(功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);转移至 10mL 试管中,95℃水浴 20min(盖紧,防止水分散失),隔 5min 振摇试管 1 次,使充分混匀;取出试管冷却后,用蒸馏水定容到 5ml,混匀,8000g 25℃离心 10min,取上清液待测。2﹑组织:称取 0.1~0.2g 样品,加入 0.75ml 提取液充分匀浆;转移至 10ml 试管中;95℃水浴 20min(盖紧,防止水分散失),隔 5min 振摇试管 1 次,使充分混匀;待组织全部溶解后, 取出试管冷却后,用蒸馏水定容到 5ml,混匀,8000g 25℃离心 10min,取上清液待测。测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 620nm,蒸馏水调零。2、调节水浴锅至 95℃。
3、试剂二工作液的配制:在试剂二中倒入 6mL 蒸馏水,缓慢倒入 24mL 浓硫酸,充分溶解混匀后使用;用不完的试剂 4℃保存一周;
4、加样表(在 EP 管中反应):
| 试剂(μL) | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
| 待测样本 | 60 | ||
| 试剂一 | 60 | ||
| 蒸馏水 | 60 | ||
| 试剂二 | 240 | 240 | 240 |
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2、 如果 A3-A1 大于 2,需要将样本用蒸馏水稀释,计算公式中乘以相应稀释倍数。
糖原含量的计算:
1、按照样本质量计算糖原(mg/g 鲜重)=1.11×(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)= 0.555×(A3-A1)÷
(A2-A1)÷W
2、按照蛋白质含量计算
糖原(mg/mg prot)=1.11×(C 标准×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)=0.111×(A3-A1) ÷
(A2-A1) ÷Cpr
1.11:是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数,即 111ug 糖原用蒽酮试剂显色相当于
100ug 葡萄糖用蒽酮所试剂显示的颜色;C 标准管:标准管浓度,0.1mg/mL;V1:加入反应体系中待测样本体积,0.06mL;V2:加入提取液体积,5mL; Cpr:样本蛋白质浓度, mg/mL;W:样本鲜重,g。
注意:最低检测限为 10ng/g 鲜重或 0.1ng/ mg prot。
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文献和实验【实验目的】 1. 掌握肝糖原提取的原理和方法。 2. 掌握定性比较饱食和饥饿家兔肝糖原含量的原理和方法。 【实验原理】 糖原是葡萄糖在机体内的重要储存形式之一。主要储存在肝细胞和肌细胞内,分别称为肝糖原和肌糖原,其中肝糖原储存量约占肝重的5%,肌糖原储存量约占肌重的2%~3%。肝糖原储存量虽不多,但在代谢过程中,它是机体内糖的重要来源之一。其合成或分解对血糖浓度的调节起着重要作用。许多因素
【实验目的】 1. 掌握肝糖原提取的原理和方法。 2. 掌握定性比较饱食和饥饿家兔肝糖原含量的原理和方法。 【实验原理】 糖原是葡萄糖在机体内的重要储存形式之一。主要储存在肝细胞和肌细胞内,分别称为肝糖原和肌糖原,其中肝糖原储存量约占肝重的5%,肌糖原储存
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