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糖原含量测试盒

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  • XK-SJH-A500
  • 国产
  • 2025年07月18日
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      100

    • 英文名

      Glycogen content test kit

    • CAS号

    • 保质期

      1年

    • 供应商

      上海晅科生物科技有限公司

    • 保存条件

      2-8℃

    • 规格

      100管/96样

    产品细节图片1
    糖原含量试剂盒说明书


    微量法 100 管/96 样

    正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:

    糖原是由葡萄糖单位构成的高分子多糖,是糖的主要的储存形式之一,主要贮存在肝和肌肉中作为备用能量,分别称为肝糖原和肌糖原。肝糖原可调节血糖浓度,当血糖升高时可在肝脏合成糖原,血糖降低时,肝糖原则分解为葡萄糖以补充血糖。因此,肝糖原对维持血糖的相对平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的储存形式,在剧烈运动消耗大量血糖时,肌糖原不能直接分解成血糖,必须先分解产生乳酸,随血液循环到肝脏,通过糖异生转变为肝糖原或葡萄糖。

    测定原理:

    蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原,在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量。

    需自备的仪器和用品:

    可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、浓硫酸(不允许快递)和蒸馏水。

    试剂的组成和配制:

    提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
    试剂一:0.1mg/mL 的葡萄糖标准液 10mL×1 瓶,4℃保存; 试剂二:粉剂×1 瓶, 4℃保存;

    糖原提取:

    1﹑细胞或细菌:收集 500~1000 万细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;加入 0.75mL 提取液超声波破碎细菌或细胞(功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);转移至 10mL 试管中,95℃水浴 20min(盖紧,防止水分散失),隔 5min 振摇试管 1 次,使充分混匀;取出试管冷却后,用蒸馏水定容到 5ml,混匀,8000g 25℃离心 10min,取上清液待测。2﹑组织:称取 0.1~0.2g 样品,加入 0.75ml 提取液充分匀浆;转移至 10ml 试管中;95℃水浴 20min(盖紧,防止水分散失),隔 5min 振摇试管 1 次,使充分混匀;待组织全部溶解后, 取出试管冷却后,用蒸馏水定容到 5ml,混匀,8000g 25℃离心 10min,取上清液待测。

    测定步骤

    1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 620nm,蒸馏水调零。
    2、调节水浴锅至 95℃。
    3、试剂二工作液的配制:在试剂二中倒入 6mL 蒸馏水,缓慢倒入 24mL 浓硫酸,充分溶解混匀后使用;用不完的试剂 4℃保存一周;
    4、加样表(在 EP 管中反应):
    试剂(μL) 空白管 标准管 测定管
    待测样本     60
    试剂一   60  
    蒸馏水 60    
    试剂二 240 240 240
    混匀,置 95℃水浴 10min(盖紧,防止水分散失),冷却,取 200μL 转移至微量石英比色皿或 96 孔板中,于 620nm 波长处,分别读取空白管、标准管和测定管吸光度,分别记为 A1、A2 和 A3。

    相关图片:
    产品细节图片2产品细节图片3
     
    注意:1、空白管和标准管只要测一次。
    2、 如果 A3-A1 大于 2,需要将样本用蒸馏水稀释,计算公式中乘以相应稀释倍数。

    糖原含量的计算:

    1、按照样本质量计算
    糖原(mg/g 鲜重)=1.11×(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)= 0.555×(A3-A1)÷
    (A2-A1)÷W
    2、按照蛋白质含量计算
    糖原(mg/mg prot)=1.11×(C 标准×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)=0.111×(A3-A1) ÷
    (A2-A1) ÷Cpr
    1.11:是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数,即 111ug 糖原用蒽酮试剂显色相当于
    100ug 葡萄糖用蒽酮所试剂显示的颜色;C 标准管:标准管浓度,0.1mg/mL;V1:加入反应体系中待测样本体积,0.06mL;V2:加入提取液体积,5mL; Cpr:样本蛋白质浓度, mg/mL;W:样本鲜重,g。
    注意:最低检测限为 10ng/g 鲜重或 0.1ng/ mg prot。
    产品细节图片4

     

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