- ￥4180
- Xkbio
- XK-SJH-A371
- 国产
- 2025年07月14日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Methyl Citrate Synthase (MCS) Test Kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/96样
甲基柠檬酸合酶（metheyl-citrate synthase，MCS）试剂盒
微量法 100 管/96 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：
MCS 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，与柠檬酸合酶（CS）共同参与三羧酸循环的调节。测定原理：
MCS 催化丙酰 CoA 和草酰乙酸产生甲基柠檬酰辅酶A，进一步水解产生甲基柠檬酸；该反应促使无色的 DTNB 转变成黄色的 TNB，在 412nm 处有特征吸光值。需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水试剂组成和配制：
试剂一：液体 100mL×1 瓶，-20℃保存； 试剂二：液体 20mL×1 瓶，-20℃保存； 试剂三：液体 1.5mL×1 支，-20℃保存； 试剂四：液体 30mL×1 瓶，4℃保存； 试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存；试剂六：粉剂×1 支，-20℃保存，临用前加入 1mL 蒸馏水，用不完的试剂仍-20℃保存；
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：① 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
② 将匀浆 600g，4℃离心 5min。
③ 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。
④ 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的 CS（此步可选做）。
⑤ 在步骤④的沉淀中加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率 20％或200W，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），用于线粒体 CS 测定。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 412nm，蒸馏水调零。2、样本测定
- 在试剂五中加入 1mL 无水乙醇和 22mL 试剂四，混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（ 其它物种）孵育 5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
- 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、220μL 试剂五和 10μL 试剂六，混匀，记录 412nm 处 20 秒时的初始吸光度 A1 和 2 分 20 秒时的吸光度 A2，计算 ΔA=A2-A1。
- 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
- 按样本蛋白浓度计算：
- 按样本鲜重计算：
MCS（nmol/min /g 鲜重）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（W× V 样÷V 样总）÷T=177.8×ΔA÷W
- 按细菌或细胞密度计算：
- 使用 96 孔板测定的计算公式如下：
- 按样本蛋白浓度计算：
- 按样本鲜重计算：
MCS（nmol/min /g 鲜重）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（W ×V 样÷V 样总）÷T=355.6×ΔA÷W
- 按细菌或细胞密度计算：
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验后通过加热可以是蛋白失活，从而不需纯化便可以进行连接反应。 4.XbaI是典型的dam甲基化敏感内切酶，您可以分析您的载体序列，看是否是甲基化敏感，如果是甲基化敏感，那么您的载体肯定切不开，可以有两种解决方案：A.用甲基化缺陷型菌株转化提取质粒之后再做酶切,NEB有免费赠送的甲基化缺陷型菌株；B.可以用phi29DNA聚合酶进行链置换反应，再进行酶切就可以切开了。 qingchagood wj1989113 wrote:
量的研究，被称为原位杂交组织化学或原位杂交细胞化学(In situ hybridization cytoehemistry)。它是将重组DNA技术与组织细胞化学技术相结合，在细胞原位显示某种特定基因，mRNA及其产物(特异蛋白)的表达、定位、半定量和变化规律的一种新技术。cDNA的制备因所显示的mRNA的不同而各异，必须借助于重组DNA技术。mRNA在RNA依赖性DNA聚合酶的作用下，可反转录产生cDNA，因此先提取细胞中已知的特定mRNA，在反转录酶的作用下合成与其互补的cDNA，经限制性内切酶作用
)用于细胞内核糖体RNA的定位等研究，现在被广泛用来进行细胞内特殊核酸序列的定性、定位和定量的研究，被称为原位杂交组织化学或原位杂交细胞化学(In situ hybridization cytoehemistry)。它是将重组DNA技术与组织细胞化学技术相结合，在细胞原位显示某种特定基因，mRNA及其产物(特异蛋白)的表达、定位、半定量和变化规律的一种新技术。cDNA的制备因所显示的mRNA的不同而各异，必须借助于重组DNA技术。mRNA在RNA依赖性DNA聚合酶的作用下，可反转录产生cDNA
技术资料
