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- Xkbio
- XK-SJH-A366
- 国产
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Mitochondrial citric acid (MCA) content test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8°C
- 规格：
50管/48样
线粒体柠檬酸（Mitochondrion citric acid, MCA）含量试剂盒
分光光度法 25 管/24 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
CA 是线粒体三羧酸循环的第一个中间产物，由柠檬酸合酶催化乙酰 CoA 与草酰乙酸合成， 其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。配合测定bing酮酸含量、bing酮酸脱氢酶活性、乙酰 CoA 含量、柠檬酸合酶活性和 CA 含量， 其中（1）bing酮酸含量和bing酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度，（2）综合分析bing酮酸含量、bing酮酸脱氢酶活性和乙酰 CoA 含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰CoA 情况，（3）乙酰 CoA 含量、柠檬酸合酶活性和 CA 含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。
测定原理：
CA 在柠檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性条件下，α-酮酸进一步与ben肼反应，生成相应的α-酮酸ben腙；α-酮酸ben腙在 330nm 处有吸收峰，该波长下吸光度的变化程度可反映出 CA 的含量。自备仪器和用品：
分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL 石英比色皿、研钵和蒸馏水。试剂组成和配制：
酸性提取液：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。碱性提取液：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 7.5mL×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体 2.5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 7.5mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃ 保存；
标准品：液体 1mL×1 支，10μmol/mL 柠檬酸标准液，4℃保存。
线粒体中柠檬酸提取：
称 0.05~0.1g 样品（建议称 0.1g 样本），加入 0.5mL 酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃ 离心 5min；取上清至另一 EP 管中，11000g/min 4℃离心 10min，弃上清（取 300μL 该上清液和 300μL 碱性提取液中和后可用于细胞质 CA 含量测定）；沉淀即线粒体，向沉淀中加
入 0.5mL 酸性提取液，充分悬浮溶解，超声波破碎（功率 20％，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），取此溶液 300μL 和 300μL 碱性提取液中和，混匀，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。
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测定步骤：
1、分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 330nm，蒸馏水调零。2、试剂一、二和三 37℃预热 10min。
3、样本测定：
空白管和标准管通常只需要各做一个。
| 试剂名称(μL) | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
| 试剂一 | 300 | 300 | 300 |
| 蒸馏水 | 300 | ||
| 标准液 | 300 | ||
| 样本 | 300 |
| 试剂二 | 100 | 100 | 100 |
| 试剂三 | 300 | 300 | 300 |
柠檬酸含量计算：
- 按蛋白浓度计算
×V 样]÷（V 样÷Cpr）=10×(ΔA 测定管－ΔA 空白管)÷(ΔA 标准管－ΔA 空白管)÷Cpr 蛋白质含量需要另外测定。
- 按样本鲜重计算
样]÷（W×V 样÷V 样总）=10×(ΔA 测定管－ΔA 空白管)÷(ΔA 标准管－ΔA 空白管)÷W
C 标准管：标准液浓度，10μmol/mL； V 样：加入反应体系中样本体积：0.3mL；V 样总： 加入提取液体积：1mL；Cpr：样品蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
注意：最低检测限为 10nmol/mg prot 或 1μmol/g 鲜重。
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文献和实验针对同一指标，生化试剂盒和 ELISA 试剂盒的检测结果趋势是一致的吗？
一、两种方法检测原理 两种方法的基本原理都是朗伯-比尔定律，但是具体形成过程和检测的方法不一样的。 1) 生化试剂盒检测原理 生化试剂盒检测的本质就是某物质化学变化的显色反应，其反应过程可以划分为四个区：延迟区、等速区、过渡区和平衡区，以时间为横坐标、吸光度为纵坐标作图，如下所示： 延迟区：无规律可寻。 等速区：对应的是速率法，一般应用于酶活力的检测。 过渡区：对应的是固定时间法，目的是解决某些化学反应的非特异性问题，提高准确度。 平衡区：对应的是终点法，主要是测定某物质在样本中的含量。 目前
以下检测方法：1、线粒体功能2、DNA Cycle3、Caspases4、Annexin V Assay5、DNA Fragmentation Assays基本上涵盖了细胞凋亡的各个期，对各种检测方法的原理和特点做一个简单介绍。线粒体功能检测的试剂盒有深圳达科为公司代理的试剂盒（产品编号为BVK250）和BD公司出售的盒Apo-Alert试剂盒。其检测主要采用阳离子型荧光染料。原理是：正常细胞中，染料可以在线粒体内聚集，发出明亮的红色荧光；而细胞凋亡后，其线粒体膜电位发生改变，染料无法进入线粒体，只能
转移酶在冰上混合后加入。 j. 4度孵育过夜后放37度30min k. PBS清洗终止反应，荧光显微镜观察。 可是还是连阳性对照都没有信号。 请问，哪位做过，指点一下吧，谢谢。 或者发到我的邮箱：weiwangsky@hotmail.com dnazyme 首先，我不是高人没有搞过凋亡研究。 不过，我提醒你一句，商业化的凋亡试剂盒一般都是针对特定阶段。例如，针对细胞膜变化、Caspase酶活性、针对线粒体状态
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