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中性转化酶(NI)测试盒

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  • 2026年05月27日
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      33

    • 英文名

      Neutral Invertase (NI) Test Kit

    • CAS号

    • 保质期

      1年

    • 供应商

      上海晅科生物科技有限公司

    • 保存条件

      2-8℃

    • 规格

      100管/48样

    产品细节图片1
    中性转化酶(Neutral invertase, NI)试剂盒


    微量法 100 管/48 样

    正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:

    蔗糖转化酶(Invertase,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH,将高等植物 Ivr 分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI) 两种类型。
    NI 主要存在于细胞质中,负责分解细胞质中蔗糖为果糖和葡萄糖。

    测定原理:

    NI 催化蔗糖分解产生还原糖,进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在 510nm 有特征光吸收,在一定范围内 510nm 光吸收值与还原糖生成量成正比。通过光吸收增加速率来计算 NI 活性

    自备用品:

    可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

    试剂组成和配制:

    提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存; 试剂一:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;
    试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 10mL 试剂一充分溶解备用;用不完的试剂 4℃ 保存;
    试剂三:液体 15mL×1 瓶,4℃保存;

    粗酶液提取:

    按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL
    提取液),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

    测定步骤和加样表:

    1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 510nm,蒸馏水调零。
    2、样本测定,(在 EP 管中依次加入下列试剂):
    试剂名称(μL) 测定管 对照管
    样本 50 50
    试剂一   200
    试剂二 200  
    混匀, 37℃准确水浴 30min 后,95℃水浴 10min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变)
    试剂三 125 125
    混匀,95℃水浴 10min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀,取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中, 510nm 处记录各管吸光值A,如果吸光值大于 2,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数),ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需设一个对照管。

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    NI 活性计算:
    1. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
    标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0016x -0.001;x 为标准品浓度(μg/mL),y 为吸光值。
    1. 按蛋白浓度计算:
    单位的定义:37℃每 mg 蛋白每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
    NI 活性(μg/min /mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr
    1. 按鲜重计算:
    单位的定义:37℃每 g 组织每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
    NI 活性(μg/min /g  鲜重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷W
    V1:加入反应体系中样本体积,0.05mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,30min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
    1. 用 96 孔板测定的计算公式如下
    标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0008x -0.001;x 为标准品浓度(μg/mL),y 为吸光值。
    1. 按蛋白浓度计算:
    单位的定义:37℃每 mg 蛋白每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
    NI 活性(μg/min /mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷Cpr
    1. 按鲜重计算:
    单位的定义:37℃每 g 组织每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
    NI 活性(μg/min /g 鲜重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =41.6×(ΔA +0.001)
    ÷W
    V1:加入反应体系中样本体积,0.05mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,30min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
    产品细节图片4

     

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