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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
33
- 英文名:
Neutral Invertase (NI) Test Kit
- CAS号:
无
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
100管/48样

中性转化酶(Neutral invertase, NI)试剂盒
微量法 100 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:
蔗糖转化酶(Invertase,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH,将高等植物 Ivr 分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI) 两种类型。NI 主要存在于细胞质中,负责分解细胞质中蔗糖为果糖和葡萄糖。
测定原理:
NI 催化蔗糖分解产生还原糖,进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在 510nm 有特征光吸收,在一定范围内 510nm 光吸收值与还原糖生成量成正比。通过光吸收增加速率来计算 NI 活性自备用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。试剂组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存; 试剂一:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 10mL 试剂一充分溶解备用;用不完的试剂 4℃ 保存;
试剂三:液体 15mL×1 瓶,4℃保存;
粗酶液提取:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤和加样表:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 510nm,蒸馏水调零。2、样本测定,(在 EP 管中依次加入下列试剂):
| 试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
| 样本 | 50 | 50 |
| 试剂一 | 200 | |
| 试剂二 | 200 |
| 试剂三 | 125 | 125 |
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NI 活性计算:
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
- 按蛋白浓度计算:
NI 活性(μg/min /mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr
- 按鲜重计算:
NI 活性(μg/min /g 鲜重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷W
V1:加入反应体系中样本体积,0.05mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,30min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
- 用 96 孔板测定的计算公式如下
- 按蛋白浓度计算:
NI 活性(μg/min /mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷Cpr
- 按鲜重计算:
NI 活性(μg/min /g 鲜重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =41.6×(ΔA +0.001)
÷W
V1:加入反应体系中样本体积,0.05mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,30min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
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