- ￥1380
- Xkbio
- XK-SJH-A559
- 国产
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Aminopyrine-N-demethylase (AND) test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/48样
氨基比林-N-脱甲基酶(ANDP活性测定试剂盒
微量法 100 管/48 样
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差ᔲ大的ṧ本做预测定˚测定意义：
㓶胞色素P450 酶是一组在外源物质代谢中,尤ަ是药物和毒物,ާ有重要作用的酶系˚AND作为P450 酶系的重要一员,相当于CYP3A4 亚型,与药物的去甲基化反应密࠷相关˚
测定原理：
AND 催化氨基比林释放甲醛,通过Nash 比色法测定甲醛含䟿,ণ可䇑算出AND 活性˚自备仪器和用品：
普通离心机,超速离心机ǃ水浴锅ǃ可调式移液枪ǃ紫外࠶光光度䇑/酶标仪ǃ微䟿石英比色皿/96 孔板ǃ蒸馏水ǃ无水乙醇和冰˚试剂组成和配制：
试剂一:粉剂×1 瓶,4℃保存˚临用前加 100mL 蒸馏水充࠶溶解˚ 试剂二:液体×1 瓶,4℃保存˚试剂й:粉剂×1 管,4℃避光保存˚临用前加入 1mL 无水乙醇,充࠶溶解˚ 试剂四:粉剂×1 管,4℃保存˚临用前加入 0.5mL 蒸馏水,充࠶溶解˚
试剂五:粉剂×1 瓶,室温保存˚临用前加蒸馏水 4mL 充࠶溶解˚ 试剂ޝ:液体×1 瓶,室温保存˚
试剂七:液体×1 瓶,4℃保存˚
标准液:液体×1 瓶,-20℃保存˚临用前取 1.5mL EP 管,加入 10µl 标准液,加 990µl 蒸馏水,混匀ণ为 0.05 mmol/L 标准 醛溶液,4℃保存˚
粗酶液提取：
1ǃ除去㓶胞Ṩ,线粒体等大࠶子物质:ƒ约 0.5g 组㓷,加入 1 mL 试剂一,冰k充࠶研磨,10 000g 4℃离心 30min,取k清液转入超速离心管˚
2ǃ粗制微粒体:4℃,100 000g,离心 60min,ᔳk清液˚
3ǃ除血红蛋白等杂质:向步骤 2 的沉淀中加 1mL 试剂一,盖紧后充࠶震荡溶解,100 000g
离心 30min,ᔳk清液˚
4ǃ最8微粒体:向步骤 3 的沉淀中加试剂二 0.5 mL,盖紧后充࠶震荡溶解,ণ粗酶液,待测˚该待测液需当天使用˚
AND 活性测定操作：
- ࠶光光度䇑/酶标仪预热 30 min,调节波长到 412 nm,蒸馏水调零˚
- 试剂二置于 37℃水浴中预热 30min˚
- 对照管:取 1 支 EP 管,加入 10µL 粗酶液,170µL 试剂二,10µL 试剂й,10µL 蒸馏水,混匀后置于 37℃水浴保温 30min:立ণ加入 35µL 试剂五,混匀后置于冰浴中 5min:取出后加入 35µL 试剂ޝ,混匀后室温静置 5min:室温 8000rpm 离心 5min:取新的 EP 管,加入100µL k清液,100µL 试剂七,混匀后 60℃水浴 10min,然后取出,用冷水冷K 5min,于 412nm 测定光吸收,记为A 对照管˚
- 测定管:取 1 支 EP 管,加入 10µL 粗酶液,170µL 试剂二,10µL 试剂й,10µL 试剂四,混匀后置于 37℃水浴保温 30min:立ণ加入 35µL 试剂五,混匀后置于冰浴中 5min:取出后加入 35µL 试剂ޝ,混匀后室温静置 5min:室温 8000rpm 离心 5min:取 1 支新EP 管,加入100µL k清液,100µL 试剂七,混匀后 60℃水浴 10min,然后取出,用冷水冷K 5min,于 412nm 测定光吸收,记为A 测定管˚
- 标准管:取 1 支EP 管,加入 100µL 标准品,100µL 试剂七,混匀后 60℃水浴 10min,然后取出,用冷水冷K 5min,于 412nm 测定光吸收,记为A 标准管˚
相关图片：
AND 活性计算：
- 使用微䟿石英比色皿测定的䇑算¿式如7 (1)按蛋白浓度䇑算
AND 活性(nmol/min/mg prot) = C 标准品× V 标准品×(A 测定管—A 对照管)÷A 标准管× 稀
释倍数÷(Cpr×V ṧ)÷T
= 45×(A 测定管—A 对照管)÷A 标准管÷Cpr˚
(2)按ṧ本质䟿䇑算
活性单位定义:37℃中⇿࠶钟⇿克组㓷催化产生 1nmol 甲醛为 1 个酶活单位˚
AND 活性(nmol/min/g 鲜重 ) = C 标准品×V 标准品×(A 测定管—A 对照管)÷A 标准管×稀释倍数÷(V ṧ÷V ṧ总×W)÷T
= 45×(A 测定管—A 对照管)÷A 标准管÷W˚
C 标准品:0.05 mmol/L=50µmol/L:V 标准品:500µL=0.0005 L:稀释倍数:V 反总÷V k清液=(50+850 +50+50+175+175)÷500=2.7:Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本¿司 BCA 蛋白质含䟿测定试剂盒:V ṧ:加入粗酶液体〟,50µL=0.05mL:
V ṧ总:提取液体〟,0.5mL:T:催化反应时间(min),30min˚
- 使用 96 孔板测定的䇑算¿式如7 (1)按蛋白浓度䇑算
AND 活性(nmol/min/mg prot) = C 标准品×V 标准品×(A 测定管—A 对照管)÷A 标准管× 稀
释倍数÷(Cpr×V ṧ)÷T
= 45×(A 测定管—A 对照管)÷ A 标准管÷ Cpr˚
(2)按ṧ本质䟿䇑算
活性单位定义:37℃中⇿࠶钟⇿克组㓷催化产生 1nmol 甲醛为 1 个酶活单位˚
AND 活性(nmol/min/g 鲜重) = C 标准品×V 标准品×(A 测定管—A 对照管)÷A 标准管×稀释倍数÷(V ṧ÷V ṧ总×W)÷T
= 45×(A 测定管—A 对照管)÷ A 标准管÷W˚
C 标准品:0.05 mmol/L=50µmol/L:V 标准品:500µL=0.0005 L:稀释倍数:V 反总÷V k清液=(50+850 +50+50+175+175)÷500=2.7:Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本¿司 BCA 蛋白质含䟿测定试剂盒:V ṧ:加入粗酶液体〟,50µL=0.05mL:
V ṧ总:提取液体〟,0.5 mL:T:催化反应时间(min),30min˚
注意事项：
1ǃ粗酶液需在当日完成测定,如需保存,则向粗酶液提取步骤 3 的沉淀中加 0.5ml 20%的甘油,࠶装后,-80℃保存:2ǃ试剂й和试剂四需临用前配制,如当天没有用完,4℃避光保存,可用 1 周:
3ǃ粗酶液可直接用于蛋白浓度测定,建议用BCA 法测蛋白含䟿˚
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文献和实验复制相关，组蛋白的去乙酰化和基因的失活相关。组蛋白乙酰化是一个动态过程，乙酰化和去乙酰化处于动态平衡状态。 乙酰化转移酶(histoneacetyltransferases，HAT)主要是在组蛋白 H3、H4 的 N 端尾上的赖氨酸加上乙酰基，去乙酰化酶(histonedeacetylase，HDAC)则相反，不同位置的修饰均需要特定的酶来完成。乙酰化酶家族可作为辅激活因子调控转录，调节细胞周期，参与 DNA 损伤修复，还可作为 DNA 结合蛋白。去乙酰化酶家族则和染色体易位、转录调控、基因
甲醛（去甲基作用的副产物）的形成。因此，易受洗涤剂、 巯基和一系列离子的干扰。与甲基化检测试剂盒类似，这些检测试剂盒对任何去甲基化酶都没有特异性，只能用纯化的蛋白进行检测。 组蛋白去甲基化酶检测试剂盒通过直接测定去甲基化产物的形成来规避这些问题，可确保： 组蛋白去甲基化酶检测试剂盒通过直接测定去甲基化产物的形成来规避这些问题，可确保： 灵敏度比基于甲醛的检测试剂盒更高（20 - 1,000 倍） 无硫醇、洗涤剂或离子干扰的更准确的数据 与核提取物或纯化蛋白的相容性（得益
性，当与羧酸结合时，可中和氨基酸负电荷。甲基化是由甲基转移酶介导的，S-腺苷甲硫氨酸 (SAM) 是主要的甲基供体。涉及甲硫氨酸循环。甲基化如此频繁，以至于 SAM 被认为是 ATP 之后酶促反应中最常用的底物。此外，尽管 N-甲基化不可逆，但 O-甲基化可能可逆。甲基化是众所周知的表观遗传调控机制，因为组蛋白甲基化和去甲基化会影响 DNA 的转录可用性。氨基酸残基可以偶联到单个甲基或多个甲基上，以增加修饰的效果。下图提供了与核小体核心颗粒相关的 PMT 的图解。图示：与组蛋白颗粒相关的翻译后修饰。核小体
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