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- XK-SJH-A460
- 国产
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Acid protease test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/48样
酸性蛋白酶（Acid protease, ACP）试剂盒说明书
微量法 100T/48S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。测定意义：
ACP 是一种在酸性环境下催化蛋白质水解的酶。该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒澄清、酱油酿造、饲料等。测定原理：
酸性条件下，ACP 催化酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；钨蓝在 680nm 有特征吸收峰，通过测定其吸光度增加，来计算 ACP 活性。自备仪器和样品：
水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、0.5 mL EP 管和蒸馏水。
试剂组成和配置：
液体一：2mL×1 支，4℃保存。液体二：1mL×1 支，4℃保存。试剂一的配制：临用前按液体一：液体二：蒸馏水=90（μL）：20（μL）：21（mL）的比例
配制，现配现用，如出现白色絮状沉淀则不能用。试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加 4mL 蒸馏水溶解。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 10mL 试剂一，沸水浴中磁力搅拌溶解。（可在烧杯上盖一层保鲜膜，注意观察，避免水分全部蒸发，一般加热 15-30 分钟，该试剂为过饱和试剂，充分混匀后仍出现颗粒物不溶物不影响使用）。
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 20mL 蒸馏水溶解。试剂五：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。
标准品：液体 1mL×1 支，0.25μmol/mL 标准酪氨酸溶液，4℃保存。
粗酶液提取：
1、 试剂一的配制：见试剂的组成和配制。2、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，即粗酶液。
3、 血清或培养液：直接测定。
4、 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
测定操作：
- 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到 680 nm，蒸馏水调零。
- 试剂二、试剂三和试剂四置于 30℃水浴保温 30min。
- 对照管：取 0.5 mL EP 管，加入 20μL 粗酶液，40μL 试剂二，混匀后置于 30℃水浴保温10min；加入 40μL 试剂三，混匀后 8000g，4℃离心 10min；取 40μL 上清液，加入新的 EP 管，再加入 200μL 试剂四，40μL 试剂五，混匀后置于 30℃水浴保温 20min，取 200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板，680nm 测定光吸收，记为 A 对照管。
- 测定管：取 0.5 mL EP 管，加入 20μL 粗酶液，40μL 试剂三，混匀后置于 30℃水浴保温10min；加入 40μL 试剂二，混匀后 8000g，4℃离心 10min；取 40μL 上清液，加入新的 EP 管，再加入 200μL 试剂四，40μL 试剂五，混匀后置于 30℃水浴保温 20min，取 200μL 于微
- 空白管：取 0.5 mL EP 管，加入 40μL 蒸馏水，200μL 试剂四，40μL 试剂五，混匀后置于
空白管。
- 标准管：取 0.5 mL EP 管，加入 40μL 标准品，200μL 试剂四，40μL 试剂五，混匀后置于30℃水浴保温 20min，取 200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板，于 680nm 测定光吸收，记为 A 标准管。
ACP 活性计算公式：
1. 按照样本蛋白浓度计算ACP 活性单位定义：30℃每毫克蛋白每分钟水解产生 1nmol 酪氨酸为 1 个酶活单位。ACP 活性（nmol/min /mg prot）= C 标准品×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）×V 反总÷(Cpr×V1)÷T= 125×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）÷Cpr 2．按照样本质量计算
ACP 活性单位定义：30℃每克样品每分钟催化水解产生 1 nmol 酪氨酸为 1 个酶活单位。
ACP 活性（nmol/min /g 鲜重）=C 标准品×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）
×V 反总÷（W×V1÷V2）÷T= 125×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）÷W
3. 按照液体体积计算
ACP 活性单位定义：30℃每毫升样品每分钟催化水解产生 1nmol 酪氨酸为 1 个酶活单位。ACP 活性（nmol/min/mL）=C 标准品×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）×V 反总÷V1÷T= 125×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）
1. 按照细胞数量计算
ACP 活性单位定义：30℃每 104 个细胞每分钟催化水解产生 1nmol 酪氨酸为 1 个酶活单位。ACP 活性（nmol/min /104 cell）=C 标准品×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）×V 反总÷（细胞数量×V1÷V2）÷T= 125×（A 测定管－A 对照管）÷（A 标准管－A 空白管）÷细胞数量
C 标准品：0.25 μ mol/mL 标准酪氨酸溶液；V 反总：酶促反应总体积，0.1mL；Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL）；V1：加入反应体系中粗酶液体积（mL），0.02 mL；V2：提取液总体积（mL），1mL；T：催化反应时间（min），10min；W：样品质量（g）。
注意事项：
- 试剂一按操作指示配制，用多少配多少，出现白色絮状沉淀则不能用。
- 临用前配制的试剂配置好后 3 天内使用完毕。
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文献和实验问：有谁知道酸性蛋白酶产生菌的筛选方法？谢谢您的帮助。 答：下载这几篇文章看看： 1、酸性蛋白酶高产菌株的选育 http://www.wanfangdata.com.cn/qikan/periodical.articles/lsyslgy/lsys99/lsys9903/990313.htm 2、酸性蛋白酶高产菌株6042（Aspergillus niger6042）的选育和形态鉴定 http://engine.cqvip.com/content/citation.dll?id
蛋白质和酶时一般采用低温（5度以下）操作。为了避免蛋白质提以过程中的降解，可加入蛋白水解酶抑制剂（如二异丙基氟磷酸，碘乙酸等）。下面着重讨论提取液的pH值和盐浓度的选择。1、pH值蛋白质，酶是具有等电点的两性电解质，提取液的pH值应选择在偏离等电点两侧的pH 范围内。用稀酸或稀碱提取时，应防止过酸或过碱而引起蛋白质可解离基团发生变化，从而导致蛋白质构象的不可逆变化，一般来说，碱性蛋白质用偏酸性的提取液提取，而酸性蛋白质用偏碱性的提取液。2、盐浓度稀浓度可促进蛋白质的溶，称为盐溶作用。同时稀盐溶液因盐
大鼠神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)酶联免疫分析（ELISA）
(GFAP) ，再与 HRP 标记的神经胶质纤维酸性蛋白 (GFAP) 抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的神经胶质纤维酸性蛋白 (GFAP) 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠神经胶质纤维酸性蛋白 (GFAP) 浓度。 试剂盒组成 ： 试剂
