- ￥2480
- Xkbio
- XK-SJH-A340
- 国产
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Mitochondrial Respiratory Chain Complex IV/Cytochrome C Oxidase Test Kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/96样
线粒体复合体Ⅳ试剂盒
微量法 100 管/96 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素 C 氧化酶，也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责催化还原型细胞色素 C 的氧化，并最终把电子传递给氧，生成水。
测定原理：
还原型细胞色素 C 在 550nm 有特征光吸收，线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素 C 生成氧化型细胞色素 C，因此 550nm 光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制：
试剂一：液体 100mL×1 瓶，-20℃保存； 试剂二：液体 20mL×1 瓶，-20℃保存； 试剂三：液体 1.5mL×1 瓶，-20℃保存； 试剂四：液体 20mL×1 瓶，4℃保存； 试剂五：粉剂×1 支，-20℃保存；试剂六：粉剂×1 支，-20℃保存；
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：1、 准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、 将匀浆 600g，4℃离心 5min。
3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11100g，4℃离心 10min。
4、 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅳ（此步可选做）。
5、 步骤④中的沉淀即为线粒体，加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴， 功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10 秒，重复 30 次），用于复合体Ⅳ酶活性测定。
测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 550nm，蒸馏水调零。2、 样本测定
- 工作液的配制：临用前将试剂五和试剂六依次转移到试剂四中混合溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）孵育 5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
- 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 20μL 样本和 200μL 工作液，混匀，记录 550nm
注意点：若 ΔA 大于 0.2，需将样本用试剂二稀释适当倍数（计算公式中乘以相应稀释倍数），使 A1-A2 小于 0.2，可提高检测灵敏度。
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复合体Ⅳ活力单位的计算：
- 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
- 按样本蛋白浓度计算
复合体Ⅳ活力(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=19.20×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
- 按样本鲜重计算
- 按细菌或细胞密度计算
复合体Ⅳ活力(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.008×ΔA V 反总：反应体系总体积，2.2×10-4 L；ε：细胞色素 C 摩尔消光系数，1.91×104 L / mol /cm； d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.02 mL；V 样总：加入提取液体积，0.202 mL； T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。
- 使用 96 孔板测定的计算公式如下：
- 按样本蛋白浓度计算
复合体Ⅳ活力(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=38.39×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
- 按样本鲜重计算
- 按细菌或细胞密度计算
复合体Ⅳ活力(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.016×ΔA V 反总：反应体系总体积，2.2×10-4 L；ε：细胞色素 C 摩尔消光系数，1.91×104 L / mol /cm； d：96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.02 mL；V 样总：加入提取液体积，0.202 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。
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文献和实验可逆性ATP酶，能在外能驱动下逆浓差转运H 。线粒体内膜呼吸链中有三个酶复合体具有质子泵功能，能将H 由内腔转运到外腔，它们是：细胞色素c氧化酶、辅酶QH2 - 细胞色素c还原酶、NADH- 辅酶Q还原酶。细菌的的质膜上普遍有质子泵，有的伴有呼吸链组分。嗜盐菌膜上的菌紫质（bacteriorhodopsin）受光照驱动，可将H 运入菌体内浓集。
性起调节作用。很多凋亡的关键步骤包括caspase激活物的释放和电离子通道的改变，以及线粒体膜电位差的丢失等都发生于线粒体，因此线粒体 对凋亡的发生或抑制起重要作用。 (一)细胞色素C释放与凋亡复合体的形成 在研究哺乳细胞凋亡的生物化学反应时，发现某些位于线粒体内膜的蛋白可以直接启动细胞凋亡，并导致细胞色素C释放到细胞质或细胞核。被释放的细胞色素C可以和Apaf―1结合，改变其构象，大大增加后者与dATP／ATP的亲和性，并且使细胞色素C―Apaf―1形成多聚体。与此
可以看出CoQ在复合物Ⅰ与Ⅲ，Ⅱ与Ⅲ之间传递还原当量，Cyt c在复合物Ⅲ与Ⅳ之间传递还原当量。他们又将这四种复合物1：1：1：1的比例混合，加上CoQ和Cyt c重组，基本上恢复了线粒体原有的催化能力。 借助上述 实验方法 ，呼吸链各组分的排列顺序已基本明确，但仍有些不一致的看法，其中以CoQ至细胞色素C这一部分研究得还很不清楚，对于Fe-S和CoQ的定位和数量也有争议。 (二)氧化呼吸链 1.NADH氧化呼吸链 人体
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