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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
Phospholipase C (PLC) test kit
- CAS号:
无
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8°C
- 规格:
50管/48样

磷脂酶 C( Phospholipases C,PLC )试剂盒
分光光度法 50 管/48 样注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义磷脂酶 C(EC 3.1.4.3)是一种水解甘油磷酸酯 C3 位点甘油磷酸酯键的脂类水解酶,广泛存
在于微生物及动植物的组织和细胞中,在细胞代谢、细胞传递、生长发育等方面具有重要作用。
测定原理
磷脂酶 C 催化水解 NPPC 产生对硝基ben酚,在 410nm 处有特征吸收峰。自备实验用品及仪器
天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅。试剂组成和配制
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。试剂一:液体 55mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 25mL×1 瓶,4℃避光保存。试剂三:液体 20mL×1 瓶,4℃保存。
酶液提取
1. 组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于 4℃,10000g 离心 5min,取全部上清于 4℃、100000g
离心 30min,弃上清,取沉淀溶于 1mL 试剂一。
2. 细胞:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后于 4℃,10000g 离心 5min,取全部上清于 4℃、100000g 离心 30min,弃上清,取沉淀溶于 1mL 试剂一。
3. 血清:直接测定。
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酶活计算公式
标准曲线:y = 0.0191x - 0.0103,R2 = 0.9991
- 按照蛋白浓度计算
PLC 活性(nmol/min/mg prot)=(△ A+0.0103)÷ 0.0191×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T
= 17.45×(△A+0.0103)÷ Cpr
- 按照样本质量计算
PLC 活性(nmol/min/g 鲜重)=(△ A+0.0103)÷ 0.0191×V 反总÷(V 样÷V 样总×W) ÷T
= 17.45×(△A+0.0103)÷ W
- 按照细胞数量计算
PLC 活性(nmol/min/104 cell)=(△ A+0.0103)÷ 0.0191×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量) ÷T
= 17.45×(△A+0.0103)÷ 细胞数量
- 按照液体体积计算
PLC 活性(nmol/min/mL)= (△ A+0.0103)÷ 0.0191×V 反总÷V 样÷T
= 17.45×(△A+0.0103)
V 反总:反应总体积,1mL;V 样:加入样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;
Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min
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生化检测,又称临床化学,是在研究人体健康和疾病的生物化学过程变化的基础上,利用化学、生物学、病理学、免疫学、生物化学的理论与技术,通过检测人体血液、尿液、脑脊液等样本中化学物质的量与质的变化,为临床医生或研究者提供疾病诊断、病情监测等信息。 生化检测试剂盒,则为生化检测提供了便捷——将测定特定指标所需要的试剂制成可直接使用或简单配制即可使用的固体或液体,为广大科研工作者省去查询文献资料、采购各种化学试剂、摸索试验条件、优化实验体系等所需要的时间和精力,同时,也大大节约了样本量,获得更可靠
网络 二、磷脂酶C PLC是存在于胞浆膜上一个关键酶,有9种异构体,分为α、β、γ和δ四组。PLC作用于PIP2产生三磷酸肌醇(IP3)和二酰基甘油(DAG),IP3和DAG是 T细胞活化的重要信号。除PLCα组外,其余PLC组均不具有跨膜序列,所以PLC在水解PIP2时必须与细胞膜结合。在T细胞活化过程中,参与信号转导的主要为PLCγ
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