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二胺氧化酶测试盒

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  • ¥1780
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  • XK-SJH-A244
  • 国产
  • 2025年07月14日
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      100

    • 英文名

      Diamine oxidase test kit

    • CAS号

    • 保质期

      1年

    • 供应商

      上海晅科生物科技有限公司

    • 保存条件

      2-8℃

    • 规格

      100管/48样

    二胺氧化酶(Diamine Oxidase,DAO)试剂盒说明书

    微量法 100T/48S

    注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

    测定意义:
    DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物(肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等)、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛,其活性与核酸和蛋白合成密切相关,能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。

    测定原理:

    DAO 催化尸胺产生醛和过氧化氢,外源添加过量的辣根过氧化物酶,催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成氧化型邻联茴香胺,在 460nm 处有特征吸收峰,通过测定该波长吸光度增加速率,计算DAO 活性。

    自备实验用品及仪器:

    天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。

    试剂组成和配制:

    提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。试剂一:液体 0.25mL×1 支,4℃保存。试剂二:液体 2mL×1 管,4℃保存。试剂三:液体 1mL×1 管,4℃保存。粗酶液提取:
    1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,
    加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 20min,取上清,置冰上待测。
    1. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1  的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
    2. 血清等液体:直接测定。

    测定操作表:

    1、分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 460nm,蒸馏水调零。
    2、操作表
      对照管 测定管
    粗酶液(μL) 50 50
    提取液(μL) 128 108
    试剂一(μL) 2 2
    试剂二(μL) 20 20
    试剂三(μL)   20
    混匀,37℃水浴 30min,微量石英比色皿/96 孔板,蒸馏水调零,测定 460nm 吸光值。ΔA=A
    测定-A 对照。


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    酶活性计算公式:

    1. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
    1. 按样本蛋白浓度计算:
    酶活性定义:在 pH7.2,温度为 37℃条件下,每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1nmol H2O2
    所需的酶量为一个酶活力单位(U)。
     

    DAO 活性(nmol/min/mg prot)=

    A460 ×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 18×A





    ÷Cpr
     
     
    1. 按样本质量计算:

     ´ d

    460
     
    酶活性定义:在 pH7.2,温度为 37℃条件下,每克组织每分钟催化产生 1nmol H2O2 所需
    的酶量定义为一个酶活力单位。
     

    DAO 活性(nmol/min/g 鲜重)=

    A460 ×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T= 18×A ÷W


     
     
    1. 按细胞数量计算:

     ´ d

    460
     
    酶活性定义:在 pH7.2,温度为 37℃条件下,每 104 个细胞每分钟催化产生 1nmol H2O2
    所需的酶量定义为一个酶活力单位。
     

    DAO 活性(nmol/min/104cell)=

    A460 ×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)÷T= 18×A ÷


     


    细胞数量

     ´ d

    460
     

    (4) 按液体体积计算
    酶活性定义:在 pH7.2,温度为 37℃条件下,每毫升血清每分钟催化产生 1nmol H2O2 所需的酶量定义为一个酶活力单位。
     

    DAO 活性(nmol/min/mL)=

    A460 ×V 反总÷V 样÷T= 18×A

     ´ d




    460
     
    ε:氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数:7.5 L/mmol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应中样本体积,0.05mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr: 样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min
    1. 用 96 孔板测定的计算公式如下
    1. 按样本蛋白浓度计算:
    酶活性定义:在 pH7.2,温度为 37℃条件下,每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1nmol H2O2
    所需的酶量为一个酶活力单位(U)。
     

    DAO 活性(nmol/min/mg prot)=

    A460 ×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 36×A





    ÷Cpr
     
     
    1. 按样本质量计算:

     ´ d

    460
     
    酶活性定义:在 pH7.2,温度为 37℃条件下,每克组织每分钟催化产生 1nmol H2O2 所需
    的酶量定义为一个酶活力单位。
     

    DAO 活性(nmol/min/g 鲜重)=

    A460 ×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T= 36×A ÷W


     
     
    1. 按细胞数量计算:

     ´ d

    460
     
    酶活性定义:在 pH7.2,温度为 37℃条件下,每 104 个细胞每分钟催化产生 1nmol H2O2
    所需的酶量定义为一个酶活力单位。
     

    DAO 活性(nmol/min/104cell)=

    A460 ×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)÷T= 36×A ÷


     


    细胞数量
    (4) 按液体体积计算

     ´ d

    460
     
    酶活性定义:在 pH7.2,温度为 37℃条件下,每毫升血清每分钟催化产生 1nmol H2O2 所
    需的酶量定义为一个酶活力单位。
     

    DAO 活性(nmol/min/mL)=

    A460 ×V 反总÷V 样÷T= 36×A

     ´ d




    460

    ε:氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数:7.5 L /mmol/cm;d:96 孔板光径,0.5cm;V 反总: 反应总体积,0.2mL;V 样:反应中样本体积,0.05mL;V 样总:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min

    注意事项:

    1、如果 OD 值小于 0.01,适当加大提取用样本量;OD 值大于 0.8,粗酶液可适当稀释,或者减少提取用样本量。
    2、样品蛋白质含量需要另外测定。


    产品细节图片3产品细节图片4

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