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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
Diamine oxidase test kit
- CAS号:
无
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
100管/48样
二胺氧化酶(Diamine Oxidase,DAO)试剂盒说明书
微量法 100T/48S
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。测定意义:
DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物(肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等)、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛,其活性与核酸和蛋白合成密切相关,能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。
测定原理:
DAO 催化尸胺产生醛和过氧化氢,外源添加过量的辣根过氧化物酶,催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成氧化型邻联茴香胺,在 460nm 处有特征吸收峰,通过测定该波长吸光度增加速率,计算DAO 活性。自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。试剂组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。试剂一:液体 0.25mL×1 支,4℃保存。试剂二:液体 2mL×1 管,4℃保存。试剂三:液体 1mL×1 管,4℃保存。粗酶液提取:- 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,
- 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
- 血清等液体:直接测定。
测定操作表:
1、分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 460nm,蒸馏水调零。2、操作表
| 对照管 | 测定管 | |
| 粗酶液(μL) | 50 | 50 |
| 提取液(μL) | 128 | 108 |
| 试剂一(μL) | 2 | 2 |
| 试剂二(μL) | 20 | 20 |
| 试剂三(μL) | 20 | |
| 混匀,37℃水浴 30min,微量石英比色皿/96 孔板,蒸馏水调零,测定 460nm 吸光值。ΔA=A 测定-A 对照。 相关图片: ![]() ![]() |
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酶活性计算公式:
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
- 按样本蛋白浓度计算:
所需的酶量为一个酶活力单位(U)。
DAO 活性(nmol/min/mg prot)=
A460 ×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 18×A
÷Cpr
- 按样本质量计算:
´ d
460
的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO 活性(nmol/min/g 鲜重)=
A460 ×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T= 18×A ÷W
- 按细胞数量计算:
´ d
460
所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO 活性(nmol/min/104cell)=
A460 ×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)÷T= 18×A ÷
细胞数量
´ d
460
(4) 按液体体积计算
酶活性定义:在 pH7.2,温度为 37℃条件下,每毫升血清每分钟催化产生 1nmol H2O2 所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO 活性(nmol/min/mL)=
A460 ×V 反总÷V 样÷T= 18×A
460
- 用 96 孔板测定的计算公式如下
- 按样本蛋白浓度计算:
所需的酶量为一个酶活力单位(U)。
DAO 活性(nmol/min/mg prot)=
A460 ×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 36×A
÷Cpr
- 按样本质量计算:
´ d
460
的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO 活性(nmol/min/g 鲜重)=
A460 ×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T= 36×A ÷W
- 按细胞数量计算:
´ d
460
所需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO 活性(nmol/min/104cell)=
A460 ×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)÷T= 36×A ÷
细胞数量
(4) 按液体体积计算
´ d
460
需的酶量定义为一个酶活力单位。
DAO 活性(nmol/min/mL)=
A460 ×V 反总÷V 样÷T= 36×A
460
ε:氧化型邻联茴香胺毫摩尔消光系数:7.5 L /mmol/cm;d:96 孔板光径,0.5cm;V 反总: 反应总体积,0.2mL;V 样:反应中样本体积,0.05mL;V 样总:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,30min
注意事项:
1、如果 OD 值小于 0.01,适当加大提取用样本量;OD 值大于 0.8,粗酶液可适当稀释,或者减少提取用样本量。2、样品蛋白质含量需要另外测定。

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上海西唐生物科技有限公司 021-55229872, 65333639 www.westang.com 小鼠二胺氧化酶 ( DAO )ELISA 试剂盒 ( 用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内 ) 原理 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗小鼠 DAO 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 DAO与单抗结合,加入生物素化的抗小鼠 DAO
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