- ￥1580
- Xkbio
- XK-SJH-A419
- 国产
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Acetyl-CoA carboxylase kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/48样
乙酰辅酶 A 羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase，ACC)试剂盒
微量法 100 管/48 样正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义
ACC在生物体内催化乙酰辅酶A羧化生成丙二酰辅酶A，是脂肪酸和许多次生代谢产物合成的关键酶。ACC的活性在一定程度上决定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。测定原理
ACC 能够催化乙酰辅酶 A、NaHCO3 和 ATP 生成丙二酰辅酶 A、ATP 和无机磷，通过钼酸铵定磷法测定无机磷的增加量来测定 ACC 活性。需自备的仪器和用品
分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：10mL×1 瓶， 4℃保存； 试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存； 试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃保存；
试剂四：粉剂×1 瓶, 4℃保存。用时加入 25mL 蒸馏水，溶解后 4℃可保存一周。试剂五：粉剂×1 瓶, 4℃保存。用时加入 25mL 蒸馏水，溶解后 4℃可保存一周。试剂六：液体 25mL×1 瓶，室温保存。
试剂七：10μmol/mL 标准磷贮备液 10mL×1 瓶，4℃保存。
样本的前处理
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 660nm，蒸馏水调零。2、 酶促反应试剂的配制和预热：在试剂二瓶中加入 2.5mL 试剂一，充分溶解混匀；在试剂三瓶中加入 2mL 蒸馏水，充分溶解混匀；将试剂一、二、三在 37℃(哺乳动物)或 25℃ (其它物种)预热 10 分钟。
3、定磷试剂的配制：按 H2O: 试剂四:试剂五:试剂六=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷试剂应为浅黄色，若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。
注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
4、0.5μmol/mL 标准磷应用液配制：将试剂七 20 倍稀释，即取 0.5mL 试剂七加 9.5 蒸馏水，
5、酶促反应
| 试剂名称（μL） | 对照管 | 测定管 |
| 试剂一 | 90 | |
| 试剂二 | 50 | |
| 试剂三 | 40 | |
| 样本 | 10 | 10 |
6、定磷
| 标准管 | 空白管 | 对照管 | 测定管 | |
| 0.5μmol/mL 标准磷应用液 | 20 | |||
| 蒸馏水 | 20 | |||
| 上清液 | 20 | 20 | ||
| 定磷试剂 | 180 | 180 | 180 | 180 |
注意：若测定管吸光值大于 2，将样品用提取液稀释适当倍数后再进行测定，使吸光值小于2，可提高检测灵敏度，计算公式中乘以相应稀释倍数。
ACC 活性计算：
1、按组织蛋白浓度计算：
定义：每小时每毫克组织蛋白产生 1μmol 无机磷的量为一个 ACC 活力单位。
ACC (μmol/h/mg prot)=(C 标准管×V 总)×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷ (V 样×Cpr)÷T=10×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr
2、按样本鲜重计算：
定义：每小时每 g 组织产生 1μmol 无机磷的量为一个 ACC 活力单位。
ACC (μmol/h /g 鲜重)=(C 标准管×V 总)×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管）×V 总÷ (W× V 样÷V 样总)÷T=10×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
3、 按细菌或细胞密度计算：
定义：每小时每 500 万细菌或细胞产生 1μmol 无机磷的量为一个 ACC 活力单位。
ACC (U/104 cell)=(C 标准管×V 总)×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管）×V 总÷ (500× V 样÷V 样总)÷T=0.02×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
C 标准管：标准管浓度，0.5μmol/mL；V 总：酶促反应总体积，0.1mL；V 样：加入样本体积，0.01mL ；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，0.5 小时；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
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文献和实验乙酰辅酶A羧化酶 acetyl-CoA catboxyla-se
乙酰辅酶 A羧化酶 acetyl-CoA catboxyla-se 催化乙酰辅酶 A＋ ATP＋ HCO3-→丙二酰辅酶 A ADP＋ Pi反应的生物素酶。广泛存在于生物界。此反应制约着脂肪酸合成第一阶段的速度。本反应由二个步骤组成，即利用 ATP把 CO2 固定在酶所结合的生物素上和把 CO2转移给乙酰辅酶 A的反应。大肠杆菌或植物中的这种酶可以区分为催化这二个反应的蛋白质和结合生物素的蛋白质，而动物或酵母中的这种酶则不能分开，动物的酶是一种变构酶，原体不显示活性，而聚
进行脱羧或加羧反应的酶。定义含混，有下列各种使用例子：（ 1）与脱羧酶相同；（ 2）亦称α -羧化酶，也有指丙酮酸脱羧酶的（ EC 4． 1． 1． 1）；（ 3）在重视脱羧酶逆反应生成羧酸的反应时，也称此酶为羧化酶，如磷酸烯醇丙酮酸羧化酶（ EC4． 1． 1． 31）：磷酸烯醇丙酮酸 CO2 →草酰乙酸 磷酸；（ 4）与 ATP等高能化合物的分解相偶联使底物羧化的一系列的酶（连接酶）。如乙酰辅酶 A羧化酶（ EC6． 4． 1． 2）：乙酰辅酶 A ATP CO2 →丙二酸
某一代谢系统所必需，且继续为该代谢系统以外的系统消耗进行补充的物质反应。例如为了三羧酸循环协调运行，必须经常接受乙酰辅酶A的草酰乙酸。但是这个物质和它的前体物质α -酮戊二酸等又作为氨基酸合成的原料被消耗，因此必须用某种方法补充所缺乏的草酰乙酸。这种反应，在动物进行丙酮酸羧化酶反应，在植物和细菌，则进行磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶反应，从而使草酰乙酸得到补充。
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