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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
69
- 英文名：
Triose Phosphate Isomerase (TPI) Test Kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/48样
磷酸丙糖异构酶（Triose-phosphate isomerase，TPI）试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
植物叶绿体中磷酸丙糖异构酶是光合作用中参与 calvin 循环的重要酶。作用于磷酸甘油醛和磷酸二羟bing酮之间的转化，磷酸二羟bing酮能快速透过叶绿体的包膜进入细胞质，并在其中逐 步转化为蔗糖。
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后
-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃，8000g 离心 10min，取上清测定。
②胞浆和叶绿体 TPI 酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5～10 的比例（建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液一），冰浴匀浆后于 4℃，200g 离心 5min，弃沉淀，取上清在 4℃，8000g 离心 10min，取上清用于测定胞浆 TPI 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液二，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃， 8000g 离心 10min，取上清测定叶绿体中 TPI 酶活性。
建议测定总 TPI 酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的 TPI， 则按照步骤②提取粗酶液。
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测定意义
植物叶绿体中磷酸丙糖异构酶是光合作用中参与 calvin 循环的重要酶。作用于磷酸甘油醛和磷酸二羟bing酮之间的转化，磷酸二羟bing酮能快速透过叶绿体的包膜进入细胞质，并在其中逐 步转化为蔗糖。
测定原理
磷酸丙糖异构酶将磷酸二羟bing酮转化为 3-磷酸甘油醛，3-磷酸甘油醛与 NAD 在 3-磷酸甘油醛脱氢酶的作用下生成 3-磷酸甘油酸和 NADH，340nm 处的吸光度变化反映了磷酸丙糖异构酶的活性的高低。自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、研钵、震荡仪、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿。试剂组成和配制
提取液一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。提取液二：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后
-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
酶液提取
①总 TPI 酶提取：建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液一，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃，8000g 离心 10min，取上清测定。
②胞浆和叶绿体 TPI 酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5～10 的比例（建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液一），冰浴匀浆后于 4℃，200g 离心 5min，弃沉淀，取上清在 4℃，8000g 离心 10min，取上清用于测定胞浆 TPI 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液二，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃， 8000g 离心 10min，取上清测定叶绿体中 TPI 酶活性。
建议测定总 TPI 酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的 TPI， 则按照步骤②提取粗酶液。
测定操作
- 分光光度计预热 30min，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
- 取 1mL 石英比色皿，依次加入 600μL 试剂一，100μL 试剂二，100μL 试剂三，100μL 试剂四，100μL 粗酶液，充分混匀，记录 340nm 处 10s 的吸光值 A1 和 310s 的吸光值 A2，
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计算公式
- 按照样本蛋白浓度计算
TPI（nmol/min /mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
- 按照样本质量计算
TPI（nmol/min /g 鲜重）= ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=321.54×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，1mL；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
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技术资料磷酸丙糖异构酶（TPI）生化试剂盒
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