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- 文献和实验
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2-8°C避光保存
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见详情说明
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20
- 供应商:
上海博尔森生物
- 规格:
500 ml
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文献和实验缓慢滴加 650μl 预热的类器官培养基,确保基质胶被完全覆盖。放于 37℃,5%CO2 的培养箱中培养,每 2-3 天更换培养基(用于换液的类器官培养基内不含 Y27632)。 类器官传代 14、吸出类器官培养液,机械分离 Matrigel,然后加入 500μl 胰蛋白酶,放置于 37℃ 培养箱中孵育 1-2min 后,用移液器多次吹打,从基质胶中释放类器官。 15、用含有 10%FBS 的 DMEM/F12 培养基终止消化,在 4℃ 条件下 300g 离心 5min。 16、用冷 PBS
没长出来,DMEM/F12时,24小时候,培养瓶中会出现一种很细小的像细菌一样的小东西,但是培养液一直是清亮的,这些小东西经过染色不着色,而且随着时间延长而大量增多,有的一直漂在液中,有的会贴服培养瓶底部,冲洗不掉,不知道是什么东西? 2:关于组织剪碎: 由于我取的是阴道残端的一小块组织,但是肉眼没法仅将上皮层取下,故直接完全剪碎,直接铺板。 可有人说应该剪得块大些,用镊子夹着组织块,让上皮层的面朝向培养瓶的底部,这个确实很难做到,因为组织本来就很小,稍做剪碎
,在其中解剖。根据我的经验,即使是0度,神经元还是在进行着很大程度代谢。所以,hanks的无糖环境很不利。我个人建议,用DMEM-高糖或DMEM-F12+马血清来浸泡解剖过程中的大脑,来供给大脑的代谢,血清可以抑制神经凋亡。这其中还有一个问题,就是DMEM培养液会在空气中变碱性。国外有的实验室用L-15培养液来浸泡解剖过程中的脑,因为L-15不会再空气中变碱性。没有L-15的(国内几乎没有),可以全程用DMEM-HG或者DMEM-F12+血清浸泡解剖过程中的脑。注意注意:一切操作都在冰浴的液体中
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