- ￥480
- Xkbio
- XK-SJH-A285
- 国产
- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
NADH-Glutamate Synthase (NADH-GOGAT) Test Kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/48样
谷氨酸合成酶（Glutamate synthase，GOGAT）试剂盒
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GOGAT 分布于植物中，和谷氨酰胺合成酶共同构成GS/GOGAT 循环，参与氨同化的调控。
测定原理：
GOGAT 催化谷氨酰胺的氨基转移到α-酮戊二酸，形成两分子的谷氨酸；同时 NADH 氧化生成 NAD+，340nm 吸光度的下降速率可以反映GOGAT 活性大小。需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂组成和配制：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：液体 60mL×1 瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×2 瓶，4℃保存；粗酶液提取：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。2、 样本测定
- 在试剂二中加入 25mL 试剂一充分溶解混匀，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；现配现用（配好后 3h 内用完）；
- 取 0.1mL 样本和 0.9mL 工作液于 1mL 比色皿中，混匀，加工作液的同时开始计时， 在340 nm波长下记录20 秒时的初始吸光度A1 和5 分20 秒时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。
- 按样本蛋白浓度计算：
GOGAT（nmol /min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V×样 Cpr) ÷T=321×ΔA÷Cpr
- 按样本鲜重计算：
GOGAT（nmol /min /g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=321×ΔA÷W
- 按细菌或细胞密度计算：
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文献和实验亦称谷氨酰胺 -2-氧代（α酮）戊二酸氨基转移酶。缩写为 GOGAT。此酶可催化谷氨酰胺的胺基在 NAD（ P） H或还原型铁氧还蛋白的存在下，还原转移于α -酮戊二酸，生成 2分子谷氨酸： L-谷氨酰氨 α -酮戊二酸 [2H]→ 2L-谷氨酸也可以说是以谷氨酰胺的胺基为氨供体还原α -酮戊二酸为谷氨酸的酶。是含 Fe及 S的黄素酶， EC1， 4， 1， 13（ NADPH）， 1， 4， 1， 14（ NADH）， 1， 4， 7， 1（含铁氧还素
(3)第2个ATP对氨甲酸磷酸化，生成氨基甲酰磷酸和ADP。 此反应是不可逆的，消耗2分子ATP。CPS1是一种变构酶，AGA是此酶变构激活剂。由乙酰CoA和谷氨酸缩合而成。 肝细胞线粒体中谷氨酸脱氢酶和氨基甲酰磷酸合成酶I催化的反应是紧密偶联的。谷氨酸脱氢酶催化谷氨酸氧化脱氨，生成的产物有NH3和NADH+H+。NADH经NADH氧化呼吸链传递氧化生成H2O，释放出来的能量用于ADP磷酸化生成ATP。因此谷氨酸脱氢酶催化反应不仅为氨基甲酰磷酸的合成提供了底物NH
缩合。首先从CH3CO基上除去一个H+，生成的阴离子对草酰乙酸的羰基碳进行亲核攻击，生成柠檬酰CoA 中间体 ，然后高能硫酯键水解放出游离的柠檬酸，使反应不可逆地向右进行。该反应由柠檬酸合成酶(citrate synthetase)催化，是很强的放能反应。 由草酰乙酸和乙酰CoA合成柠檬酸是三羧酸循环的重要调节点，柠檬酸合成酶是一个变构酶，ATP是柠檬酸合成酶的变构抑制剂，此外，α-酮戊二酸、NADH能变构抑制其活性，长链脂酰CoA也可抑制
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