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- XK-SJH-A374
- 国产
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Aconitase (ACO) activity detection kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/48样
顺乌头酸酶（ACO）活性检测试剂盒
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
顺乌头酸酶（aconitase），三羧酸循环中的酶，催化柠檬酸转变为异柠檬酸。柠檬酸本身不易氧化，在顺乌头酸酶作用下，通过脱水与加水反应，使羟基由β碳原子转移到α碳原子上， 生成易于脱氢氧化的异柠檬酸，为进一步的氧化脱羧反应作准备。
测定原理
ACO 催化柠檬酸转化成异柠檬酸，异柠檬酸氧化脱羧将 NAD+ 还原生成NADH，导致 340nm处光吸收上升。
需自备的仪器和用品
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制
试剂一：50mL×1 瓶，-20℃保存； 试剂二：10mL×1 瓶，-20℃保存； 试剂三：1mL×1 支，-20℃保存；试剂四：液体 60mL×1 瓶，4℃保存； 试剂五：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂六：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加 3mL 蒸馏水充分溶解；现配现用试剂七：粉剂×1 支，4°保存；临用前加 36mL 试剂四充分溶解；
工作液：临用前在 36mL 试剂七中加入 3mL 蒸馏水、3mL 试剂四、3mL 试剂五、3mL 试剂六充分混匀
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：1、 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、 将匀浆转入离心管内 600g，4℃离心 5min。
3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。
4、 上清液即胞浆提取物，可用于测定胞质顺乌头酸酶活性。
5、 在步骤④的沉淀中加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率 20％或
200W，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），用于线粒体顺乌头酸酶活性测定。
测定步骤
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。2、 样本测定
（1）将工作液，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min；现配现用；若分次用将工作液分装后于-20°保存，一星期内可用。
（3）在 1mL 石英比色皿中加入 100μL 样本 900μL 工作液，混匀，立即记录 340nm 处 20s
时的吸光值 A1 和 3min20s 后的吸光值 A2，计算ΔA=A2-A1。ACO 活性计算
相关图片：
用石英比色皿测定的计算公式如下
- 按样本蛋白浓度计算
ACO 活性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V 样) ÷T=536×ΔA÷Cpr
- 按样本鲜重计算
ACO（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=108×ΔA÷W
- 按细菌或细胞密度计算
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技术资料顺乌头酸酶（ACO）活性测试盒
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