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赖氨酸(LYS)测试盒

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  • 2025年07月10日
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      100

    • 英文名

      Lysine (LYS) test kit

    • CAS号

    • 保质期

      1年

    • 供应商

      上海晅科生物科技有限公司

    • 保存条件

      2-8℃

    • 规格

      100T/96S

    赖氨酸(lysine,Lys)含量测定试剂盒说明书

    微量法 100 管/96 样

    正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

    测定意义:

    赖氨酸是人体必需氨基酸之一,能促进人体发育、增强免疫功能,并有提高中枢神经组织功能的作用。赖氨酸为碱性必需氨基酸。由于谷物食品中的赖氨酸含量甚低,且在加工过程中易被破坏而缺乏,故称为第一限制性氨基酸。

    测定原理:

    蛋白质中的赖氨酸具有一个游离的 ε-NH2,它与茚三酮试剂反应生成蓝紫色物质,其颜色的深浅在一定范围内与赖氨酸的含量成线性关系。亮氨酸与赖氨酸的碳原子数目相同,而且仅有—个游离氨基(ε-NH2),所以通常用亮氨酸配制标准液。

    需自备的仪器和用品:

    可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、蒸馏水、水浴锅。

    试剂的组成和配制:

    提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
    试剂一:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 12.5mL 试剂三充分溶解混匀; 试剂二:液体 12.5mL×1 瓶,4℃保存;
    试剂三:液体 15mL×1 瓶,4℃保存; 试剂四:60%乙醇,自备。

    赖氨酸提取:

    样本烘干粉碎,称取约 0.01g 样本,加入 1mL 提取液,充分匀浆。80℃水浴提取 20min,冷却后 10000g 离心 10min,取上清待测。

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    产品细节图片1产品细节图片2

    测定步骤

    1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 530nm,蒸馏水调零。
    2、 工作液的配制:取 10mL 试剂一与 10mL 试剂二混合摇匀,取上清备用。用不完的试剂
    4℃保存。
    3、 在有盖 EP 管中加入下列试剂:
    试剂名称(μL) 测定管 空白管
    样本 100  
    提取液   100
    工作液 200 200
    混匀,80℃水浴 30min(盖紧,以防止水分散失),冷却至常温。
    试剂四 300 300
    混匀,取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中,于 530nm 波长处记录吸光值 A。△A=A
    测定管-A 空白管。空白管只要做一管。
     

    赖氨酸含量计算:

    1. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
    标准条件下测定回归方程为 y = 0.0062x - 0.0212;x 为亮氨酸含量(µg/mL ),y 为吸光值。
    1. 按照蛋白浓度计算
    赖氨酸含量(µg/ mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.00 62×V1] ÷( Cpr ×V1)×1.1515
    =185.73×(△A+0.0212) ÷Cpr
    1. 按照样本质量计算
    赖氨酸含量(µg/g 干重)=[(△A +0.0212)÷0.00 62×V1] ÷(W ×V1÷V2)×1.1515
    =185.73×(△A+0.0212) ÷W
    V1:加入反应体系中样本体积,0.1mL;V2:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;1.1515,校正系数。
    1. 用 96 孔板测定的计算公式如下
    标准条件下测定回归方程为 y = 0.0031x - 0.0212;x 为亮氨酸含量(µg/mL ),y 为吸光值。
    1. 按照蛋白浓度计算
    赖氨酸含量(µg/ mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.00 31×V1] ÷( Cpr ×V1)×1.1515
    =371.45×(△A+0.0212) ÷Cpr
    1. 按照样本质量计算
    赖氨酸含量(µg/g 干重)= [(△A +0.0212)÷0.0 031×V1] ÷(W ×V1÷V2)×1.1515
    =371.45×(△A+0.0212) ÷W
    V1:加入反应体系中样本体积,0.1mL;V2:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;1.1515,校正系数。

    产品细节图片3

     

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