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半胱氨酰亚砜裂解酶(CSL)测试盒

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  • XK-SJH-A190
  • 国产
  • 2025年07月13日
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      100

    • 英文名

      Cysteinyl Sulfoxide Lyase (CSL) Test Kit

    • CAS号

    • 保质期

      1年

    • 供应商

      上海晅科生物科技有限公司

    • 保存条件

      2-8℃

    • 规格

      100管/48样

    半胱氨酰亚砜裂解酶(L-cysteine sulfoxide lyase, CSL)试剂盒说明书

     
    微量法 100T/48S
     
    注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。测定意义
    半胱氨酰亚砜裂解酶(CSL)广泛存在于百合科葱属(如大蒜和洋葱),十字花科芸薹属
    (如卷心菜,菜花,西兰花),以及豆科中的合金欢属中,并通常被称为蒜氨酸酶(Alliinase)。香菇酸在γ-谷氨酰转肽酶和半胱氨酸亚砜裂解酶的作用下转化成香菇精,以及产生bing酮酸、乙醛、甲醛和NH3。CSL 是内源性甲醛生成的关键酶之一,测定 CSL 活性对于研究食品安全具有重要意义。

    测定原理

    CSL 催化 S-甲基-L-半胱氨酸亚砜反应产生 酮酸,与 2,4-二硝基ben肼反应,在碱性条件下显棕红色,在 510nm 下有特征吸收峰。

    自备实验用品及仪器

    天平、研钵、离心机、酶标仪、96 孔板、恒温水浴锅、蒸馏水。

    试剂组成和配制

    提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
    试剂一:粉剂×1 瓶,4℃避光保存,临用前加入 2mL 水溶解,用不完的试剂分装后-20℃保存;
    试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存,临用前加入 10mL 水溶解,用不完的试剂分装后-20℃ 保存;
    试剂三:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
    试剂四:液体 6mL×1 瓶,4℃避光保存。试剂五:液体 30mL×1 瓶,4℃保存。 样本处理
    按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL
    提取液),进行冰浴匀浆,4℃浸提 40min。12000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

    测定操作

      对照管 测定管
    样品(μL) 50 50
    试剂一(μL)   25
    蒸馏水(μL) 25  
    试剂二(μL) 25 25
    充分混匀,37℃反应 20min
    试剂三(μL) 100 100
    试剂四(μL) 50 50
    充分混匀,室温反应 5min
    试剂五(μL) 250 250
    充分混匀,静置 5min,吸取 200μL 至 96 孔板,测定 510nm 处吸光值,记为 A 对
    照和A 测定,△A=A 测定-A 对照。每个测定管设一个对照管。

    相关图片:
    产品细节图片1产品细节图片2
     
    计算公式
    标准曲线:y = 0.7313x + 0.0027,R2 = 0.9993;x 为标准品浓度:μmol/mL;y 为吸光度△A
    1. 按蛋白含量计算
    C-S lyase 活性(μmol/min/mg prot)=(△A -0.0027)÷ 0. 7313×V 样÷(V 样×Cpr )÷T
    =0.068×(△A-0.0027)÷ Cpr
    1. 按照样本质量计算
    C-S lyase 活性(μmol/min/g 鲜重)=(△A -0.0027)÷ 0. 7313×V 样÷(V 样÷V 样总×W )÷T
    =0.068×(△A-0.0027)÷ W
    V 样,加入样本上清体积,0.05mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:蛋白浓度,mg/mL;
    W:样本质量,g;T,反应时间,20min。

     

    注意事项

    1.   若测定结果中吸光值超过 1,请将样本稀释后进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。香菇类样本活性较大,可能需要稀释 80-100 倍。

    产品细节图片3

     

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