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- LABLEAD
- 北京
- C1054
- 2026年04月22日
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LABLEAD
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1mg
存储条件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。
产品简介
菁染料是性能优良的荧光标记染料，摩尔吸光系数在荧光染料中是最高的，其琥珀酰亚胺酯是最常用的脂肪氨基标记试剂，广泛用于蛋白、抗体、核酸及其他生物分子的标记和检测。通过改变次甲基链的长度, 可改变其荧光发射波长，每增加一个双键，按照Huoffman规则正好红移约100nm。
菁染料Cy3和Cy5已成为基因芯片的第一选荧光标记物；另外，Cy5, Cy5.5和Cy7的吸收在近红外区背景非常低，是荧光强度最高、最稳定的长波长染料。特别适合于活体小动物体内成像代替放射性元素
菁染料琥珀酰亚胺酯（CyDye NHS）的标记
菁染料和生物分子的比例F/P=4～12之间荧光强度最高，F/P值过高荧光探针会自我淬灭并影响生物分子的生物活性，标记生物分子最好是用单琥珀酰亚胺酯，但是用双修饰的CyDye NHS并没有发现交联。CyDye NHS标记抗体在pH (8.5～9.4)时10分钟F/P可达5～6，而在pH 7.0几乎不反应。我们用不同比例的Cy3标记anti-glutathione-S-transferase (GST)多克隆抗体发现用1:1, 5:1, 10:1 和20:1标记时得到的F/P值分别是0.28:1, 1.16:1, 2.3:1 和4.6:1。
操作步骤
1.水溶性Cy5 NHS标记(D-ser2)-leucineenkephalin
1)Cy5NHS1.0mg溶解于400uLDMSO后，加入到1mL的玻璃瓶中盛有(D-ser2)-leucine-enkephalin acetate(YSGFLT,0.75mg) 的400uL DMSO溶液。（Dye和peptide投料比是1:1）
2)然后加入15uL(C2H5)3N，常温避光搅拌反应混合物过夜。
3)用HPLC纯化蛋白，使用蛋白C18柱子(25 cm×10 mm)，每次上样注入2×400 μL，30分钟梯度洗脱从0.1%TFA水溶液到MeCN∶H2O（0.1% TFA）=70∶30，流速4mL/min。（对不同的蛋白选择不同的合适HPLC梯度流动相）
4)收集适当的色带峰，标记多肽的保留时间比未标记的多肽长。
5)产品冷冻干燥成粉末或在水溶液中，-20℃避光储存；必要时可用质谱表征。
6)CyDye标记的蛋白稳定性取决于蛋白本身。例如标记的IgG在4 ℃可避光保存2月；更长期的保存需加入等体积的甘油-20 ℃避光保存。
2. F/P计算：
Cy5在650nm的摩尔吸光系数为250000 M-1cm-1，所用蛋白在280nm处的摩尔吸光系数为170000M-1cm-1；Cy5在280nm处的吸收是650nm处的5%。
按以下公式计算F/P值:
[Cy5 dye]=(A650)/250000
[peptide]=[A280-(0.05×A650)]/170000
F/P final=[dye]/[peptide]={0.68×A650}/{A280-(0.05×A650)}
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