Uracil-DNA Glycosylase (Heat-l

碧云天生产的Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod)，也称Heat-labile Cod UDG，即热敏型鳕鱼UDG，是来源于大西洋鳕鱼(Gadus morhua cod)，可催化含尿嘧啶的DNA链中的尿嘧啶(dU)碱基和脱氧核糖之间的N-糖苷键发生水解，从而释放游离尿嘧啶。Uracil-DNA Glycosylase (UDG)可以水解含有dU的单链或双链DNA，但不能水解RNA或含有dU的长度不超过6个碱基DNA寡聚体。

UDG主要应用于消除PCR扩增过程中带来的产物污染问题。其防止污染的原理为：在PCR反应中加入适量的dUTP，以dUTP替代dTTP掺入DNA中，形成含dU碱基的PCR扩增产物；后续进行PCR反应时，使用UDG酶选择性切割可能被污染而带入的之前PCR扩增产生的含有dU的单链或双链DNA，从而避免之前的PCR扩增产物可能的污染对于本次PCR扩增带来的负面影响。

本产品为热敏型，在50℃孵育10分钟可以迅速不可逆灭活。在PCR或RT-PCR反应前，PCR或RT-PCR体系中加入Heat-labile Cod UDG室温处理5min，即可充分消除可能的之前的含有dUTP的PCR扩增产物的污染。本产品不仅适用于PCR，也适用于qPCR、RT-PCR和qRT-PCR等体系。

活性定义：One unit is the amount of enzyme required to liberate 1 nmol uracil from dU-containing DNA in one hour at 37℃.

碧云天生产的Heat-labile Cod UDG酶活性鉴定结果可参考图1。

图1.碧云天和N公司的Heat-labile Cod UDG催化酶解5µl含dU碱基的PCR扩增产物效果图。使用本产品或国外N公司的酶，在20µl体系，分别以5µl含dU碱基的PCR扩增1500bp PCR产物为底物和不同量的(0U, 0.01U, 0.02U, 0.04U, 0.2U) Heat-labile Cod UDG，在1X Heat-labile Cod UDG Buffer，37℃孵育1h，然后进行1%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，本产品与N公司相比，具有相当的酶活。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands))。

碧云天生产的 Heat-labile Cod UDG 经灭活处理后酶活鉴定结果可参考图 2。

图2.碧云天和N公司的Heat-labile Cod UDG以及碧云天生产的E. coli UDG (D7360)经50℃10min处理后，催化酶解5µl含dU碱基的PCR扩增产物效果图。将不同量的E. coli UDG (0U, 0.005U, 0.01U, 0.025U)和碧云天以及N公司不同量的Heat-labile Cod UDG (0U, 0.02U, 0.04U, 0.2U)经50℃ 10min处理之后，在20µl体系，分别以5µl含dU碱基的PCR扩增1500bp PCR产物为底物，在1X Heat-labile Cod UDG Buffer，37℃孵育1h，然后进行1%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，E. coli UDG50℃处理10min之后酶活仅轻微下降，而碧云天和N公司的Heat-labile Cod UDG均完全灭活。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands))。

来源：大肠杆菌重组、表达和纯化而获得。

纯度：不含UDG酶活力之外的内切或外切脱氧核糖核酸酶、RNase和磷酸酶活性。

用途：去除含尿嘧啶的单链或双链DNA；去除含dU的PCR产物气溶胶污染；DNA修复与突变检测；提高PCR产物的克隆效率；提高点诱变的效率；研究蛋白质-DNA相互作用。用于PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、one-step RT-PCR体系。

酶储存溶液：50mM Tris-HCl (pH 7.5), 100mM NaCl, 0.5mM EDTA, 1mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50% (v/v) glycerol。

10X Heat-labile Cod UDG Buffer：700mM Tris-HCl, 100mM NaCl, 10mM EDTA, 1mg/ml BSA, pH 8.0 at 25℃。

失活或抑制：50℃加热10min可以使Heat-labile Cod UDG完全失活。