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Thermolabile Ur
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42
12 个月
上海西格
-20℃
1000U
储存条件:-20℃。产品简介:热敏UDG酶(Thermolabile Uracil-DNA Glycosylase)通过切割尿嘧啶碱基与糖骨架之间的 N-糖苷键,从含 dU的DNA 中去除尿嘧啶。该切割生成敏感的无嘧啶位点,在高温和碱性条件下,脱碱基位点易发生水解,导致DNA链断裂成小片段。该酶对RNA和不含有尿嘧啶的DNA无作用。热敏UDG对热敏感,50℃以上的温度下可迅速完全失活。通过在核酸扩增预混液中添加热敏UDG酶,能够有效消除扩增产物的片段污染,防止核酸扩增(PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR和LAMP等等)假阳性。来源:基因工程大肠杆菌表达的热敏UDG重组酶。活性单位:一个单位的尿嘧啶DNA糖基化酶定义为在37℃下60分钟内完全降解1μg纯化的单链尿嘧啶DNA所需的酶量。 质量控制:SDS-PAGE 检测纯度大于99%,经检测无核酸外切酶、核酸内切酶和核糖核酸酶活性,无细菌基因组DNA残留。应用范围:1.核酸扩增实验中扩增产物污染的预防与清除。2.DNA中去除尿嘧啶碱基10×Taq Buffer :100 mM Tris-HCl,500 mM KCl,20 mM MgCl2,pH 8.8 @ 25°C)储存缓冲液:10 mM Tris-HCl,50 mM NaCl,1 mM DTT,0.1 mM EDTA,50% Glycerol, pH 7.5 @ 25°C
PCR反应条件优化:1、变性温度和时间:Thermolabile Uracil-DNA Glycosylase热敏UDG酶保证模板DNA解链完全是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s,再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长,可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。2、复性温度和时间:PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高,产物特异性越高。复性温度越低,产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。3、延伸温度和时间:一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时,过高的延伸温度不利于引物与模板的结合,可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间,可根据待扩增片段的长度而定,小于1kb, 1min足够;大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意,延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。4、循环数:其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%,因此不管模板浓度是多少,20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多,非特异扩增增加。
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