胰酶细胞消化液(0.25%胰酶)

细胞消化胰酶的配制

适用于，无师兄、师姐、非细心、单独开展细胞培养的实验者 对一般细胞 0.25% 胰酶(胰蛋白酶，Trypsin) 配方：100ml PBS,0.25g胰酶 步骤：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2・12H2O /2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸馏水) 2 称胰酶0.25g 3 加入PBS中，低速搅拌 〈4h冰浴中,或者4℃过夜 低速搅拌0.5h冰浴中

【求助】胰酶和血清是否影响p-akt表达？

olivial 最近想用western blot检测小胶质细胞活化后细胞内p-Akt表达情况（包括时间点），那么提蛋白时可否用胰酶消化的方法？加药前是否要将完全培养液换成无血清培养液？ ylhuang0502 Q1. 提蛋白时可否的方法？ A1.: 不要用胰酶消化， 贴壁细胞处理后，立刻至于冰上，用PBS洗三次后，直接加lysis buffer裂解提蛋白，lysis buffer的组分可查查文献，或在本版搜一下。

胰酶使用注意及贴壁细胞的消化

胰酶使用注意：1、在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。2、胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。贴壁细胞的消化：1、吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清2、加入少量胰酶细胞消化液，略盖过细胞即可，根据胰酶效率差异可以增加惑减少胰酶用量。室温放置30秒至2分钟（不同的细胞消化时间有所不同）3、显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化呈白茫状；或者用枪吹打