即用型BCA蛋白定量试剂盒

产品货号 ： B5002

储存条件 ：试剂盒中 A、B 液 4℃保存；蛋白标准品（ BSA）置于-20℃保存 ，有效期 12 个月。 

 

产品描述：

BCA（Bicinchoninic acid）法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋白质将 Cu2+  还原成 Cu+ ，产生一种紫蓝色复合物 ，在 562nm处有高的吸光值 ，该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。 BCA 蛋白浓度  测定法实现了蛋白质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。试剂盒中提供的蛋白标准品为用户制作标准曲线提供了便利。 该 BCA 蛋白浓度测定试剂盒可用于比色皿法检测 ，也可用于微孔板法检测。前者虽需较大量（ 100μL）的蛋白样品 ，但由  于其在检测中使用蛋白样品与 BCA 工作液的比率为 1:20（v/v） ，从而降低干扰物质带来的影响。后者操作简单方便 ，仅  需少量（ 10-25μL）的蛋白样品。不过 ，由于其在检测中使用蛋白样品与 BCA 工作液的比率为 1:8（v/v） ，某种程度上限  制干扰物质的承受浓度以及降低最低检测水平。本试剂盒含有一系列浓度的蛋白质标准品溶液(BSA 溶液) ，即取即用 ，无  需稀释 ，方便快捷。

 

编号	组分	产品包装/规格		储存
		500T (微孔)	B5002-C 蛋白标准品浓度梯度及编号： BSA 标准品①(0μg/mL) ；     BSA  标准品(125μg/mL) ； BSA 标准品③(250μg/mL) ；   BSA  标准品④(500μg/mL) ；   BSA 标准品⑤(750μg/mL) ；   BSA  标准品⑥(1000μg/mL)；  BSA 标准品⑦(1500μg/mL) ；  BSA 标准品⑧(2000μg/mL)
B5002-A	试剂 A	100mL		4℃
B5002 -B	试剂 B	3mL		4℃
B5002 -C	蛋白标准品（ BSA）	8 个浓度梯度各 1mL		-20℃

产品特点

1）提供即用型标准品 ，省去繁琐的稀释步骤。

2）灵敏度高 ，最小检测蛋白量可达 0.2μg ，检测浓度下限达到 10μg/mL(在 20~1000μg/ml  浓度范围内有较好的线性关 系）。

3）速度快 ，比一般的 BCA 蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。比传统的 Lowry 法检测速度约快 4 倍。

4）线性范围广 ，20-1000μg/mL 浓度范围内有较好的线性范围。

5) 准确性高：变异系数远小于考马斯亮蓝染色法。不受大部分样品中的化学物质的影响, BCA 法测定蛋白浓度的最大优点 是蛋白浓度的测定可以耐受高浓度的去垢剂, 可以兼容样品中高达  5%的 SDS; 5%的 Triton X- 100; 5%的 Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响 ，需确保 EDTA 低于  10mM  ，无 EGTA  ，二硫苏糖醇低于  1mM;  β-巯基乙 醇低于 0.01%。详情见 7 的附表 1。

6) Bradford 法与 BCA 法的对比 

方法	Bradford 法	BCA 法
灵敏度	1~5 μg	0.5 ~20 μg
时间	5~15 min	40 ~60 min
波长	595 nm	562 nm
检测不同类别蛋白质	变异系数较高	变异系数较低
吸光稳定性	1 h 内稳定	随时间变化

 

操作说明：以微孔酶标仪法为例

1 配置显色工作液：

a）计算显色工作液总量：

工作液总量  = (BSA  标准品样本个数＋待测样本个数 ) × 复孔数  ×  每个样本显色工作液体积 举例 ：BSA 标准品样本个数为 8 个 ，待测样本个数 3 个 ，复孔数 3 个。

显色工作液总量  = (8个BSA  标准品样本＋3 个待测样本 ) ×3 个复孔 ×200  μL（每个样本工作液体积） = 6.6 mL

b）根据计算出的所需显色工作液用量 ，将试剂 A 和试剂  B 按照  50:1 的体积比 ，配制显色工作液 ，充分混匀。

注意 ： 

1）由于加样可能存在误差 ，建议配制 BCA 工作液时 ，多配制  1~2  个孔的量；

2）新配制的  BCA 工作液室温密封条件下可稳定保存  24 h。

 

2 定量检测

① 分别取即用型 BSA 标准品① ~⑧ 各 20μL 加到 96 孔板中( BSA 标准品使用前须充分溶解摇匀)；

孔号	1	2	3	4	5	6	7	8
添加物	标准品①	标准品②	标准品③	标准品④	标准品⑤	标准品⑥	标准品⑦	标准品⑧
体积  ( μL）	20	20	20	20	20	20	20	20
BSA终浓度(μg/mL)	0	125	250	500	750	1000	1500	2000

② 用  1 × PBS 或  0.9% 生理盐水将样品适当稀释  (可以多作几个梯度 ，如 2 倍、4 倍、8 倍稀释) ，加 20μL 到 96 孔板的 样品孔中；

③ 各孔加入 200  μL 显色工作液 ，充分混匀 ，盖上 96 孔板盖 ，37℃孵育 30min ，冷却至室温；

注意 ：也可以室温放置2 h ，或 60℃放置  30min。 BCA 法测定蛋白浓度时 ，吸光度会随着时间的 延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而 加快。如果蛋白浓度较低 ，可在较高温度孵育 ，  或延长孵育时间。

④ 用酶标仪测定每个样品及 BSA  标准品的 A562 ，或  540~590 nm 之间的其它波长的吸光度 ，注意要减去空白对照(标 准品① + 工作液)的吸光度。

⑤ 绘制标准曲线 ，计算样品中的蛋白浓度。

注意 ：数据处理时需要去除明显错误的值。待测样品浓度可以从标准曲线中查得 , 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线， 可以从计算机给出的线性方程式计算出待测样品的浓度。

 

注意事项

1）本产品可以采用酶标仪  ( 微孔检测法 ) 或者分光光度计  ( 试管检测法 ) 测定蛋白浓度，如使用普通的分光光度计测定， 需根据比色皿的最小检测体积，适当加大  BCA 工作液的用量使其不小于最小检测体积，样品和标准品的用量可相应按比例  放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时 ，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少；

2）试剂在低温条件或长期保存可能出现沉淀 ，若发现 BCA 试剂 A 或者试剂 B 有沉淀发生。请 37ºC 温育并伴随搅拌促使 其充分溶解。如发现细菌污染 ，则应丢弃。

3）BCA 蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，显色反应的速度和温度有关，需注意保持定时和定温，以确保 精确定量。

4）每次测定都需做相应的标准曲线 ，因为显色反应与温度和时间的变化有关 ，精准蛋白定量宜每次都做标准曲线。

5）如待测样品中含较多的干扰物质 ( 具体见附表 ) ，可采用其它蛋白定量产品；

6）本公司所有产品仅限用于科研研发 ，必须专业人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程！