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- 博尔森/BIOESN
- 中国/上海
- BES-M2213
- 2025年07月14日
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20
- 细胞类型：
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- 相关疾病：
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- 物种来源：
小鼠
- 免疫类型：
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- 细胞形态：
贴壁/悬浮
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- 运输方式：
常温/干冰运输
- 年限：
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- 生长状态：
优良
- 规格：
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一、从液氮容器中取出原代细胞冻存管后，立即将细胞冻存管直接浸入37℃水浴中，在1－2分钟内摇动细胞冻存管至冻存的细胞融化。
二、用75％酒精消毒细胞冻存管后，小心打开盖子，用吸管吸出细胞悬浮液，接种到细胞培养瓶中，5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养。
三、12小时后，更换一次原代细胞培养液（全部液体），继续在5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养 。
注意事项
一、将冻存管从液氮容器中取出时，要做好防护工作，以免冻伤。
二、取冻存管后立即放入37oC水浴中，缩短解冻时间。
三、复苏最好用新配制的原代细胞培养体系。
原代细胞传代基本技术：
一、选用原代细胞生长状态好（90－95％），生长数量大于5×105进行传代。
二、吸除原代细胞培养液。用含双抗的1×PBS（pH7.4）清洗细胞培养瓶2次。
三、3ml细胞消化液加入细胞培养瓶，轻轻摇动，使细胞消化液覆细胞培养瓶底。
四、细胞培养瓶置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养2分钟后，在显微镜下观察原代细胞的消化状态。（平滑肌细胞建议只消化30s）
请记住：如贴壁细胞逐渐趋于圆形、部分悬浮后，用手指轻轻拍打细胞培养侧部至大部分贴壁细胞悬浮，加入3ml血清终止液，终止细胞消化。每种原代细胞的消化时间是有差异的。
五、吹打培养瓶中悬浮细胞若干次，再吸出细胞悬浮液，转入15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
六、弃离心管中液体，加入原代细胞培养液重悬细胞。细胞计数，确定细胞数量。
七、细胞分瓶后，加入适量原代细胞培养液至细胞培养瓶中，置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养24小时。
原代细胞冻存基本技术：
一、选用原代细胞生长状态好（90－95％），生长数量大于5×105进行冻存。
二、原代细胞冻存24小时，须换液新鲜原代细胞培养液一次。
三、贴壁的原代细胞需常规用0.25％胰酶消化，将消化后的细胞悬液收集至细胞离心管中。
四、细胞离心管在1000rpm下离心5分钟，小心弃清液。
五、将细胞冻存液加入细胞离心管中，悬浮细胞。细胞计数调整至5×105/ml。
六、将悬浮细胞放置细胞冻存管中。密封细胞冻存管。 标明细胞种类和冻存日期。
请记住：封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。
请按下列顺序降温保存原代细胞：室温→4℃（60 分钟）→ 冰箱冷冻室（60 分钟）→ 超低温冰箱（－80℃过夜）→ 液氮。
原代细胞冻存液常用配方：50%完全原代细胞培养液（不含有血清、添加剂、双抗）+ 40%胎牛血清 + 10%DMSO
原代细胞免疫荧光鉴定：
一、原代培养的细胞用 4%的多巨甲醛，室温固15 min，0.1% Triton-X-100 透膜 10 min，PBS 清洗 3 遍，每5 min，
二、山羊血清室温封闭45 min，一抗 Insulin，兔多抗，使用浓度 1 ∶ 50；Glucagon 抗体，鼠单抗，使用浓度 1 ∶ 200；
Pancreatic Polypeptide（pp）抗体，兔多抗，使用浓度1∶200，4 ℃孵育过夜，PBS 清洗 3 遍，每次 5 min，
三、加入相应的二抗 Alexa Flour 594 （山羊抗兔）或FITC（山羊抗小鼠），室温避光孵育 45 min，PBS
清洗 3 遍，每次 5 min，
四、DAPI 复染核，PBS 清洗 3遍，每次 5 min，普通荧光显微镜下观察并照相.
五、实验结果：
Insulin（200X）：图中红色荧光为Insulin阳性，阳性率＞90%，即：细胞纯度＞90%
原代细胞培养客户须知：
一、请客户收到本公司原代细胞产品后，立即对物品包装、细胞培养瓶等拍照，如有疑问或问题，须在24小时内通知本公司，提供照片和书面说明。
客户收到非冻存原代细胞后，请将原装的原代细胞瓶放入细胞培养箱内培养，4-12小时后再使用。75ml培养液含添加剂，血清及双抗，可吸出70ml左右直接使用，无需过滤。注意观察细胞情况，待贴壁率达到90%以上再按传代说明操作。
二、请客户使用T25细胞瓶传代，一瓶传二瓶。
三、谨记：培养原代细胞前三天，需对原代细胞生长状态进行拍照并注明和标记时间。若原代细胞培养生长存在质量问题，需向本公司提供原代细胞培养生长的照片和书面说明。
四、请客户使用原代细胞第3代以内。原代细胞培养传代过多，可能造成原代细胞的质量问题。
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文献和实验一、饲养环境 小鼠对环境的适应性的自体调节能力和疾病抗御能力较其他实验动物差，而小鼠的品种和品系繁多，各个品种和品系都有自己的特殊要求，因此必须根据实际情况给予一个清洁舒适的生活环境。不同等级的小鼠应生活在相应的设施中。 小鼠临界温度为低温 10℃，高温 37℃，温度中性范围 30～33℃。饲养环境控制应达到如下要求：温度 18～29℃；相对湿度 40～70％；最好控制在 18～22℃,湿度 50～60％。一般小鼠饲养盒内温度比环境高 1～2℃，湿度高 5～10％。 要保持温度、湿度相对稳定
原创 SOOF 生物学霸 2022-04-20 17:59 4 月 12 日，江苏集萃药康生物科技股份有限公司开启申购，在公司公开的招股书中显示该公司主营业务为实验动物小鼠模型的研发、生产、销售及提供相关技术服务。部分品系的小白鼠单价高达万元以上，部分品系毛利率更是高达95% 左右。 随后一条「如何看待南大教授靠卖基因敲除小鼠，一只11723元，年赚近4亿」的讨论登上知乎热榜。 图片来源：知乎 作为天坑专业之首的生物，一直以来在大家的印象里总是和辛苦，清贫，回报周期长的标签挂钩
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